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第一节 概 述 质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆 较小的DNA 片段(＜10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。在质粒载体上进行克隆 ,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA 和目的DNA 片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转

The pGL3 Luciferase Reporter Vectors provide a basis for the quantitative analysis of factors that potentially regulate mammalian gene expre

1 基因芯片技术分离目的基因 生物芯片是高密度固定在固相支持介质上的生物信息分子的微列阵。列阵中每个分子的序列及位置都是已知的，并按预先设定好的顺序点阵。基因芯片是生物芯片的一种，其上固定的是核算类物质，主要用于DNA、RNA分析。分为DNA芯片和微点阵两种。 分离目的基因是

ALKALINE PHOSPATASE(CIP) DIGESTION Digestion of protruding 5'-ends 1. Precipitate digested DNA and resuspend in a 100ml of 1X CIP Buffer.

Instructions Modified for Simpson Lab 1.PCR: Perform a standard PCR reaction using taq polymerase. (Do not use tfl as the PCR product mus

利用计算机来协助克隆 基因，称为“电子”基因克隆 （sillcon cloning），是与定位克隆 、定位候选克隆 策略并列的方法之一，即采用生物信息学的方法延伸EST序列，以获得基因部分乃至全长的cDNA序列。EST数据库的迅速扩张，已经并将继续导致识别与克隆 新基因策略发生革

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DN

实验题目 ：目的基因的亚克隆 一、实验目的 1、掌握细菌基因组提取的方法和原理。 2、掌握限制性核酸内切酶处理基因组及其结果分析。 3、掌握基因片段回收的方法。 二、实验原理 细菌基因组的提取：通过碱法或者酶法裂解细菌之后，可以将胞内的核酸和蛋白质全释放出来。DNA溶

Richard Powell Department of Microbiology, National University of Ireland, Galway, Ireland (richard.powell@nuigalway.ie) Frank Gannon Eu

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆 的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。） 一、片断平移的克隆 （也适用