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聚丙烯酰胺凝胶电泳，普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型，大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广，不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。琼脂糖通

这个方法是以phenol 及chloroform 溶菌后直接进行电泳分析，并未将质体DNA与宿主细菌染色体DNA 分离，得到的DNA 也不能用限制酶作用。但因其快速简便，所以可藉的于短时间内检定大量转形株中质体DNA 的相对分子量，以初步筛选带有重组质体的转形株。 药品试剂：

PFEG（Plused-Field Gel Electrophoresis）技术是将细菌完全包裹在一种特殊的琼脂中，然后加入一些化学试剂，比如十二烷基肌氨酸钠，蛋白酶K等，将细菌中的蛋白成分全部溶化，消化，只剩下整个序列的DNA。经稀有限制性内切酶消化后，切割成大小不等的片断，然

一. 样品的制备 1. 设计引物。用Oliga6.0对目的基因进行分析，设定引物，引物长度18-21个碱基，扩增片段以200-300bp最为合适。 2. PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑水平电泳检测，上样量

一、准备工作 1、实验器具与材料： （1）移液枪：10ul （2）吸头：20ul （3）吸头台：放置200ul和20ul的吸头一个 （4）三角烧瓶：50ml一个 （5）琼脂糖 2、实验器具的处理与准备 （1） 塑料制品：（包括吸头等） 送至高压3次，试验前将枪头

【目的要求】 1.掌握限制性核酸内切酶概念、特点及作用原理，DNA酶解技术的应用 2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段原理及其操作 3.熟悉电泳基本原理及其影响因素 【教学内容】 1．限制性核酸内切酶概念、特点及作用原理，DNA酶解技术的应用 2．DNA片段琼脂糖凝胶

核酸及蛋白质常用数据 1．核苷三磷酸的物理常数 化合物 分子量 λmax(pH7.0) 1摩尔溶液（pH7.0）中λmax时的最大吸收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 CTP 483 271 9000 0.9

Agarose gel electrophoresis (2) is employed to check the progression of a restriction enzyme digestion, to quickly determine the yield and p

电泳前半小时进行以下工作： 1．检查冷凝系统，确认管道连接密闭，不漏气。 2．在电泳槽内加入约2.2升合适的电泳液。 3．接通主机和冷凝泵电源，开启主机开关，主机自检结束后，开启冷凝系统开关按“set temp”键调节需要的电泳温度，按“actual temp”显示实际温度

学习和掌握限制性内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳的操作方法，理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具，琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定DNA片段的有效方法。 限制性核酸内切酶： 是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。是体外剪切基因片段的重要工具，所以常常与核酸聚