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醋酸纤维素薄膜电泳法分离鉴定三种腺苷酸
一、目的 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离带电颗粒原理;观察核苷酸类物质的紫外吸收现象。 二、原理 带电粒子在电场中向着与其自身带相反电荷的电极移动的现象,称为电泳。控制电泳条件(如pH 等),使混合试样中的不同组分带有不同的净电荷,各组分在电场中移动的速度或方向各不相同,从而
2010-03-03
Electrophoretic Mobility Shift Assay(EMSA)
20cm Gel Preparation, Sample Separation, and Visualization: Glass Plate Preparation: • Wash both panes of glass with windex and 70% EtOH
2010-03-03
DNA fingerprinting - agarose gel
Restriction digests consist of: 15.75 ml ddH2 O 1 µl 10 X buffer B (Boehringer Mannheim) 0.25 µl HindIII (40 U/µl) 3 µl DNA Set up dige
2010-03-03
双向电泳(two-dimensional electrophoresis)完整操作步骤
(一)第一向等电聚焦 1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT,不含Bio-Lyte)一小管(1ml/管),置室温溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT, Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml,充分混匀。 3. 从小管中取出400ml
2010-03-03
PCR扩增产物的电泳分析
凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。 一、琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度,把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖。低熔点琼脂糖熔点为62~65℃,溶解后在
2010-03-03
DNA电泳(agarose胶)操作方法
一、 试剂与材料: 1、 琼脂糖 2、 电泳缓冲液(1×TAE) 3、 10mg/ml溴化乙锭 4、 上样缓冲液 5、 电泳仪和水平电泳漕 6、 透射紫外灯 7、 胶带纸 二、 操作方法 按1~2%的琼脂糖浓度(据DNA样品分子量不同而定)配胶100ml ↓
2010-03-03
核酸电泳(RNA电泳与DNA电泳)
(一)DNA的凝胶电泳:凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。 1.琼脂糖凝胶用于分离大于200~1000bp的片段;操作简单、快速,且分离范围广,分辨率高。 2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5-500bp的片段; 效果好、分辨率极高,相差1bp的DNA片断就能分开,能容纳相对大量的D
2010-03-03
影响电泳的因素:电场和溶液
不同的带电颗粒在同一电场中泳动的速度不同。常用泳动度(或迁移率)来表示。泳动度是指带电颗粒在单位电场强度下泳的速度。 影响泳动度的主要因素有: 1、首先决定于带颗粒的性质,即颗粒所带净电荷的数量,大小及形状 一般说来,颗粒带净电荷多,直径小而接近于球形,则在电场中泳动速度快
2010-03-03
凝胶迁移(Gel Shift)实验操作方法
1.探针的标记: (1) 如下设置探针标记的反应体系: 待标记探针 (1.75pmol/微升) 2微升 T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 1微升 Nuclease-Free Water 5微升 [γ-32P]ATP(3,000C
2010-03-03
凝胶迁移实验(gel shift)基本知识问题与回答
(1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验? 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和
2010-03-03
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