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1） 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交 安装印迹装置 1．切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿，在20×SSC中室温泡1 h。 2．在膜浸泡期间，先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置，再用无菌水洗干净。 3．把两片厚滤纸用2

Northern印迹的制备 预备： 1.按下述步骤，每泳道加10～20μg总RNA或 0.5～1μgpoly(A)+RNA进行甲醛/琼脂糖凝胶电泳，将凝胶放在紫外线透照仪上，旁边置一标尺进行拍照。 a. 总RNA（10～20μg）用下列溶液在65℃温育5min： 总RNA

【操作】 1．RNA的提取见前。 2．变性胶的制备：取琼脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加热熔化，冷却至 60℃时加入5×甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混匀、制胶。待胶凝固后，置于1×甲醛凝胶电泳缓冲溶液中预电泳5min。 3．样品

一．原理 Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本同时获得这些信息。其基本步骤包括： 1. 完整mRNA的分离 2. 根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离 3. 将RNA 转移到固相支持物上，在转移

（一）Southern Blot 原理： 将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列

1.Total RNA isolation： 测定OD260，OD280及两者比值，换算出 RNA的浓度。并电泳鉴定。 2.Gel： 以80ml的1.5％甲醛琼脂糖凝胶为例： agrose：1.2g dd H2O：57.6ml 10×RNB*(RNA buffer)：

一、RNA提取 方法一、改良异硫氰酸胍提取法 试剂及其配制 异硫氰酸胍变性液： 贮存液－在含484ml 水（经DEPC处理）, 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持

1）硝酸纤维素膜或尼龙膜上的组织印迹 1．在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸，在滤纸上方放上一张普通纸，然后铺上一层尼龙膜。 2．用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片（厚度约为1mm）。如果组织表面是湿的，则在Kimwipes纸上轻轻吸干或先用蒸馏水洗涤几秒钟

1. During the run of the glyoxal gel, measure gel exactly and set up for transfer to nitrocellulose (step 2). After run, cut off bottom righ

Solutions RNase-Free water Prepare DEPC 0.1%(v/v) in Milli-Q water. Mix well, autoclave. 10X MOPS/EDTA 0.5M MOPS pH 7.0 0.01M EDTA pH 7