首页/产业动态/

WB过程中常见的问题及可能原因分析 问题 可能原因 验证或解决办法 转膜不充分 膜没有完全均匀湿透 使用100% methanol浸透膜 靶蛋白分子量小于10,000 选择小孔径的膜，缩短转移时间 靶蛋白等电点等于或接近转移缓冲液pH 值 可尝试使用其他缓冲液

(一)原理 Western blot是一种在PVDF或硝酸纤维素（NC）膜上进行的抗原抗体反应。蛋白电泳后，将蛋白转移至膜上，再与特异性抗体孵育，洗去游离的抗体，然后和酶标记的二抗孵育，再进行底物显色。由于抗原抗体反应特异性好，亲合力高，Western blot检测的灵敏度较高

本文主要介绍表达蛋白的柱层析及电泳分离,以及建立于SDS-PAGE基础上的Western杂交.Western杂交采用特异的抗血清结合反应以鉴别经SDS－PAGE分开的特异蛋白质。电泳分离的蛋白质经电转到NC膜上，一抗特异的与其抗原决定族结合，所结合的抗体可由二抗来检测。 实验1

蛋白质的检测与分析――Western blot 操作步骤 一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质（或酶）。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸称为W

1)Run protein gel. Set up blot: 2)Prepare two tupperware containers,one with dH2O and one with 1/2X Transfer Buffer (TB). 3)Remove one gl

SJF 4/00 1) Run gel (in 1:10 running/transfer buffer(10x) and H2O for a total of 1litre) at 150 volts until leading bromophenol blue band i

Culture bacteria 1. Grow glycerol stock A13 (TBP-GST in BL21) in 10ml LB and 10μl ampicillin (1:1000) 2. Shake @ 37℃ ON Induce bacteria

1. 30%储备胶溶液： 丙烯酰胺（Acr） 29.0g 　　　　　　　　　亚甲双丙烯酰胺（Bis） 1.0g 　 混匀后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室温。 2. 4×分离胶缓冲液（1mol/L Tris-HCl PH 8.8） Tris 18.17

Studying Protein Interactions by Far-Western Blotting Far-Western blotting was originally developed to screen protein expression libraries

SAMPLE PREPARATION For Protein Concentration Determination of Cell Culture 1.Decant medium from 10cm dish of adherent cells and rinse plat