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实验步骤： 1、EB病毒液的制备 复苏B95.8细胞株，使用培养基为10% FCS RPMI-1640 逐步添加培养基至细胞长至对数生长期 细胞计数，调节细胞数量为1×10^6个/ml 在CO2培养箱中继续续培养10天，中间不换液 至第10天收集培养上清，1800rp

一、原理 Matrigel 是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。 滤膜孔径一般为8um，而且膜孔都被Matrigel覆盖

外源基因进入细胞主要有三种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法，实际上其基本原理都是利用不同的方法在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入，但是由于前两者的效率低且伤害较大，所以现在除了对于一些特殊细胞系，一般的转染方法都利用脂质体。 利用脂质体转染和其他方法一样，最重要的就是

一、筛选之前确定G418浓度： 1、由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为 0.722g。 2、G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对

细胞因子(cytokine)是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称。在免疫应答过程中，细胞因子在免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。细胞因子的检测不仅是基础免疫研究的有较手段，同时在临床疾病诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测方面具有重要价值

一、基本概念 （一）基因导入(或基因转导) 将外源性基因(或基因组DNA)采用分子生物学技术人工地导入细胞，观察它在细胞中的表达，研究其生物学特性和功能，这种把基因导入细胞中的技术称为基因转导(gent transfer)或称基因转移，也简称为导入。是研究基因表达、结构和功能

Seed cells at appropriate density (5x104/well for 3T3, MPAC, BHK; 5x105/well for aTC1.6, bTC3) one to two days before transfection. Combine

Steven Finkbeiner, Departments of Neurology and Physiology, UCSF Protocol note: hood scgedule for day of transfection: [2h] - 6h gap - [1h]

Principle: Lymphocytes are transformed to establish cell lines. Mononuclear cells (lymphocytes) from anticoagulated venous blood are isolat

P.Pastoris表达载体及其元件 由于甲醇营养型酵母菌体内无天然质粒，所以携带外源基因的重组体必须整合于染色体中才能实现外源基因的表达。整合表达的优点在于保持外源基因稳定性并可产生多拷贝基因。典型的毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列，主要的结构包括：5’AOX1启