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　在功能基因组研究中，需要对特定基因进行功能丧失或降低突变，以确定其功能。由于RNAi具有高度的序列专一性，可以特异地使特定基因沉默，获得功能丧失或降低突变，因此RNAi可以作为一种强有力的研究工具，用于功能基因组的研究。将功能未知的基因的编码区（外显子）或启动子区，以反向重复的

1 .由长dsRNA引起的非特异性基因沉默 寻找哺乳动物细胞中存在RNAi的证据颇费了一番周折。 将较长的dsRNA（超过30个碱基对）转染几种特定脊髓动物细胞系统如小鼠的早期胚胎中，斑马鱼和中华仓鼠卵巢细胞中，能够诱发细胞内的RNAi现象，而在大部分脊髓动物的成体细胞中不存

由于在一些生物中RNAi的影响格外显著，有人提出在RNAi 途径中可能存在某个（信号）扩增的步骤。这种扩增可能是复制外源注入的dsRNA从而产生更多的siRNA ，也可能是直接扩增siRNA本身。这种扩增可能在RNA诱导沉默复合物（RISC）形成过程进行，作为RISC形成的补充，

1.高通量的研究基因功能 在后基因组时代，需要大规模高通量的研究基因的功能，由于RNAi能高效特异的阻断基因的表达，因而RNAi成为研究基因功能的很好的工具。研究者将线虫三号染色体上2232个基因对应的dsRNA合成出来，并注射到线虫性腺内，然后观察子代细胞分裂时出现的异常表型

现有的RNAi作用机制模型包括起始阶段和效应阶段: 1）起始阶段：dsRNA进入细胞的方式可以是外源导入或者转基因、病毒感染等。引入的dsRNA被核酸酶RNaseⅢ家族中特异识别dsRNA的Dicer酶,以一种ATP依赖的方式逐步切割成长约 21-23nt的由正反义链组成的双链

1. 研究基因功能的新工具 已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达，制作多种表型，而且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段，产生类似基因敲除的效应。线虫和果蝇的全部基因组序列已测试完毕，发现大量未知功能的新基因，RNAi将大大促进对这些新基因功

1995年，康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫（C. elegans）中的par-1基因时，发现了一个意想不到的现象。她们本是利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达，而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA（sense RNA）以期观察到基因表达的增强。但得

越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的 mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNA interfe

RNAi所产生的基因沉默具有如下特点： 1)高效性。 Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的，只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大，只有当浓度降低

马鹏鹏 薛社普 韩代书 (中国医学科学院基础医学研究所, 中国协和医科大学基础医学院细胞生物学系, 北京100005) RNAi 是由双链RNA 所引起的序列特异性基因沉默。RNAi 首先由Fire 等发现于秀丽隐杆线虫(C. elegans) 中, 他们发现将dsRNA 注