将组织匀浆后在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在一个固定离心力的作用下的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度,也同悬浮介质的粘稠度有关系。所以我们在其他条件不变的情况下,依次增加离心力和离心时间,就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部,分批收集即可收获到各种亚细胞组分。
1,小白鼠饥饿过夜。
2,断颈处死、取肝脏(动作要快)。
3,用匀浆介质洗去肝脏内残留血。
4,用剪刀剪碎肝脏组织,放入蔗糖-TKM匀浆介质I中匀浆。
5,离心,4800 RPM 15min 4℃。
6,取上清,再离心11000RPM 30min 4℃。
7,取沉淀悬浮制片,室温下染色20min,显微镜下观察。