线粒体及高尔基体永久标本的制作

2010-03-01 12:10 · Camille

(一)显示线粒体—Regand染色法 1.取材固定:固定材料必须新鲜,所以要求杀死动物后立即取材,切成1—2mm3大小的块,投入固定液中。 固定液: 3%重铬酸钾20ml 福尔马林(中性)5ml 固定4天(可在冰箱中),每天换固定液一次。4天后转入3%重铬酸钾中7天,每

(一)显示线粒体—Regand染色法

1.取材固定:固定材料必须新鲜,所以要求杀死动物后立即取材,切成1—2mm3大小的块,投入固定液中。

固定液:

3%重铬酸钾20ml

福尔马林(中性)5ml

固定4天(可在冰箱中),每天换固定液一次。4天后转入3%重铬酸钾中7天,每2天换一次液体。

2.流水冲洗24小时后,脱水、透明、包埋、切片等过程均按常规。

3.染色

(1)切片脱蜡到水(按常规);

(2)媒染:用5%铁明矾溶液,在35℃内放24小时后用蒸馏水洗;

(3)染色:苏木精液染24小时;

(4)分色:用5%铁明矾进行分色,此步要在显微镜下进行,边分色,边检查,直至适合为止;

(5)水洗;

(6)脱水——封片(按常规);

(7)镜检:线粒体被染成蓝黑色。

(二)显示高尔基体—DaFano氏硝酸钴镀银法

1.溶液的配制

(1)硝酸钴溶液:

硝酸钴1g

中性福尔马林15ml

蒸馏水35ml

(或用乙醇或甲醇30ml,中性福尔马林15—20ml,水80ml配制)

(2)硝酸银溶液:

硝酸银1.5g

蒸馏水 100m

(3)还原剂:

对苯二酚1—2g

中性福尔马林15ml

亚硫酸钠0.1—0.5g

蒸馏水100ml

2.镀银步骤

(1)固定:在硝酸钴溶液中固定10—24小时,但不宜超过24小时;

(2)蒸馏水快洗;

(3)室温下在硝酸银溶液中放置36—48小时;

(4)蒸馏水冲洗;

(5)还原剂中还原,8—24小时;

(6)蒸馏水洗,快步脱水,透明,包埋;

(7)切片—帖片—脱蜡到水—封片;

(8)镜检,高尔基体呈黑色,细胞质呈黄色。

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