【基本原理】
IL-1具有刺激多种来源的成纤维细胞增殖的作用，可用于IL-1生物活性检测。目前国内外大多数实验室常用L929细胞株（小鼠成纤维细胞瘤细胞）作为检测IL-1生物活性的靶细胞或反应细胞。MTT比色法的原理是利用四甲基偶氮唑盐[3-（4.5-dimethylthiazol-2- yl）-2，5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT]在活细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶作用下，由淡黄色被还原成蓝紫色或蓝黑色的MTT-甲肷，形成的量与活细胞代谢率及细胞增殖程度成正相关。故通过反应细胞形成的MTT-甲肷量，即可测定IL-1对L929细胞促增殖作用程度，从而间接测定IL-1的生物活性。
【材料和试剂】
（1）已诱生的IL-1待检样品：倍比稀释成不同浓度。
（2）IL-1标准品：倍比稀释成不同浓度。
（3）L929细胞：作为反应细胞或靶细胞，存活率应<95%。
（4）0.25%胰蛋白酶
（5）10%FCS-RPMI-1640完全培养液
（6）MTT：用PBS稀释成5mg/ml，用0.22μm膜过滤除菌及杂质，4℃避光保存。
（7）酸化异丙醇（含0.04mol/L HCl的异丙醇）：100ml异丙醇中加入0.4ml的36% HCl即可。
（8）96孔细胞培养板，刻度吸管，毛细吸管，加样器（头），刻度离心管，离心机，细胞计数板，倒置显微镜，5%CO2培养箱，超净工作台，酶标测定仪，570nm与630nm滤光片。
【操作步骤】
（1）将生长状况良好的L929细胞用0.25%胰蛋白酶消化2-3min；
（2）将L929细胞用10%FCS-RPMI-1640培养液洗涤2次，以去除消化液及原生长培养液；
（3）用10% FCS-RPMI-1640培养液调L929细胞浓度为2×105/ml；
（4）将L929细胞悬液加至96孔细胞培养板，100μl/孔；
（5）分别加入不同倍比稀释度的IL-1标准品和待测样品于96孔细胞培养板中，100μl/孔，各设3个复孔，同时设立培养液空白对照；
（6）置37℃，5% CO2培养箱中培养56h；
（7）将96孔培养板取出，各孔加入MTT，10μl/孔；
（8）置37℃，5% CO2培养箱中继续培养4h；
（9）取出培养板，先从各孔中轻轻吸出100μl上清液弃去，再加入酸化异丙醇或DMSO，100μl/孔，置室温10~20min，吹打震荡，充分混匀，使 MTT-甲肷产物充分溶解；
（10）用酶标仪以检测波长570nm，参考波长630nm，分别测定各孔OD值。测定应在酸化异丙醇加入后lh内完成。
【结果分析】
