【实验原理】
组织培养使用的培养基一般是由合成培养和小牛血清配制而成。合成培养基有商品出售，它是根据细胞生长的需要按一定配方制成的粉状物质。其主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和其它辅助物质。它的酸碱度和渗透压与活体内细胞外液相似。小牛血清含有一定的营养成分，更重要的是它含有细胞生长所必须的生长因子、激素、贴附因子等，这是合成培养基无法替代的。此外它还能中和有毒物质的毒性。故一般体外培养细胞时要加入一定是的小牛血清（１0%）。
【仪器、材料和试剂】
1．仪器：蠕动泵1套，滤器1套，蒸馏器，高压蒸汽灭菌锅，磁力搅拌器，pH计。
2．材料：3000mL锥形瓶，250mL或500mL培养液瓶，0.22mm的微孔滤膜。
3．试剂：双蒸水，小牛血清，合成培养基（RPMI1640），NaHCO3。
【操作步骤】
1．过滤器的准备和安装
清洗好过滤器，干燥，放入一张0.22mm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20min进行高压蒸汽灭菌处理。在超净工作台内安装好过滤装置，准备过滤。
2．合成培养基的配制
①将干粉型培养基溶于总量1/3的三蒸水中，再用1/3水冲洗包装内面两次，倒入培养液中，以保证所有干粉都溶解成培养液。搅拌使其溶解。
②根据产品说明的要求和实验补加2gNaHCO3。
③加抗生素：最终浓度青霉素为100U/ml，链霉素100μg/ml。一般市售青霉素为80万U/瓶，将其溶解在4ml体积内，每1000ml培养液中加0.5ml，即成最终浓度为100U/ml。市售链霉素为100万U/瓶，将其溶解5ml体积内，也是每1000ml加0.5ml，使其最终浓度为100μg/ml。
④调节培养液的pH值为7.0~7.2。
⑤容量瓶定容。
⑥过滤法除菌。
⑦分装于玻璃瓶中，4℃冰箱保存备用。
⑧使用时加血清。
3．小牛血清的处理
市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理，但在使用前还应做热灭活处理，即通过加热的方法破坏补体。
将血清放入56℃水浴中30min，其间要不时轻轻晃动，使受热均匀，防止沉淀析出。
4．生长培养基的配制
除无清培养之外，各种合成培养基在使用前需要加入一定量的小牛血清（约10%）。
【注意事项】
1．培养液配好后，要先抽取少许放入培养瓶内在37℃温箱内置24—48小时，以检测培养液是否有污染。然后再用于实验。
2．配制培养液所需血清的质量要合格并保持稳定。一个批号试用效果良好后，就可一次购入较多同一批号的血清，这样实验条件稳定，配液时调整pH值较易。
3．每次配液量以使用两周左右的量为宜。一次配液不要太多，一是营养成分有损失，二是容易污染。
