T细胞在机体特异性免疫应答中发挥重要作用。T细胞上TCR识别的抗原肽需要MHC分子提呈（即MHC限制性识别），同时T细胞的活化需要第二信号（如APC上B7分子与T细胞上CD28分子的结合）和细胞因子（如IL-2等）的协同作用。由于T细胞识别的特点，决定了其特异性必须考虑抗原肽的性质和提呈抗原肽的MHC分子型别。
因此对抗原特异性T细胞系的建立，通常选用健康外周血单个核细胞（PBMC），并通过针对于此T细胞的特异性表位肽，刺激与筛选出抗原特异性T细胞。
试剂材料
新鲜分离或冻存复苏的人外周血单核细胞（PBMCs）
特异性表位肽 （200mM)
R10：RPMI1640+10%FCS（hyclone）+青链霉素
IL2
操作：
新鲜分离PBMCs； 或快速复苏冻存PBMCs，置PBMCs于15ml离心管中，1300rpm离心3min，以完全去除DMSO。
加入适量RPMI1640进行细胞计数，必要时按实验需要预先完成分组设计。
重悬各组细胞于300ul RPMI1640培养基中，加入特异性表位肽使其终浓度5-10uM，于5％CO2、37℃孵箱内培养1小时。
补充加入R10培养基以调整各组细胞浓度至1.5-2×106/ml，转入24孔培养板密集培养。
培养至第3日加入IL2（10unit/ml），以使T细胞生长旺盛期扩增。
培养期间观察细胞状态和密度，一旦过密，适时增加或更换R10-IL2培养基，维持其浓度1.5-2×106/ml。
注意事项：
严格控制细胞培养密度，并严密同步观察细胞培养状态适时处理。
通常一些特异性CTLs活性在培养8-10日即可被检出，应立即进行功能学研究或立即冻存。目前检测方法主要有根据刺激肽表位的相应 MHC多聚体检测，或者根据T细胞刺激活化后产生细胞因子(如IFN-r)的特性，进行ELISPOT等方法。
