一、实验目的
1.熟练掌握贴壁细胞传代的培养方法。
2.观察传代细胞贴壁、生长和繁殖过程中细胞形态的变化。
二、实验原理
离体培养的细胞群体增殖达到一定密度时，细胞的生长和分裂速度就会减慢甚至停止，如不及时分离传代培养，细胞将逐渐衰老死亡。传代培养是指细胞从一个培养瓶以1：2或其他比例转移，接种到另一培养瓶的培养。贴壁培养细胞的传代通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代，而悬浮型生长细胞的传代则用直接传代法或离心法传代。
三、实验器材、材料和试剂
1.仪器、用具：生化培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、水浴箱、离心机、血球计数板、离心管、培养瓶、微量加样器、吸管、移液管、酒精灯、酒精棉球、试管架等。
2.材料：家蚕
3.试剂：Grace培养基、小牛血清、0.25％胰蛋白酶、Hanks液。
四、方法与步骤
1.在操作前用0.1％新洁尔灭洗净双手，在超净工作台上点燃酒精灯；
2.用75％的酒精棉球擦拭手指及各种盛溶液的瓶子及瓶塞外表面；
3.倒去瓶中的旧培养液，加入0.25%胰蛋白酶1ml；
4.静置消化2～3min，观察培养瓶中细胞开始出现花纹（细胞已经开始脱落），立即竖立培养瓶并倒净胰蛋白酶液；
5.加入3～5ml Grace培养液，用吸管冲洗细胞层，并吹打使其成为细胞悬液；
6.加入10％的小牛血清；
7.分装：一般以1：2进行分装，即一瓶细胞可传为2瓶。分装好的细胞，应在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置28℃生化培养箱。
注意：倾倒旧培养液和胰蛋白酶液后，瓶口应在火焰上烧干，勿让余液倒流回瓶中。
