[器材和试剂]
● PCR试剂和设备
● 含有起始scFV基因的载体pHENl单链模板DNA（50ng/ul）
● Geneclean试剂盒
● Wlzard PCR纯化试剂盒
● scFvJHL2XhoFOR引物：5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAG GGT GCC-3'
● scFvJH3XhoFOR引物： 5,-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAT TGT CCC3'
● scFvJH4-5XhoF（）R引物：5,-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CAG GGT TCC-3'
● scFvJH6XhoFOR引物： 5'-GAG TCA TTC TCG TCT CGA GAC GGT GAC CGT GGT GCC-3'
● XhoI限制性酶（NEB） 以及厂家的2号缓冲液（NEB2）
● VL基囚文库载体
[方法]
1. 配制50ul PCR反应混合液， 包含：
● 水，34.5ul
● 20XdNTP（每种5mmol/L）， 2,5ul
● 10XVent聚合酶缓冲液，5.0ul
● LMB3引物（10pmol/u1），2.5ul
● scF讨HXhoFOR引物（10pmol/ul），2.5ul
● scFv模板DNA（100ng）， 2.0u1
● VentDNA聚合酶（2单位），1.0u1
2. 在有加热盖的热循环仪内加热反应混合液到94℃，5分钟。
3. 以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分钟的条件共循环25次，扩增VH基因。
4. 用Wizard PCR纯化试剂盒芝之PCR产物。
5. 用XhoI和NcoI消化PCR产物；但除了用XhoI替代 NcoI,还需在NEB2缓冲液中进行消化。
6. 制备VL基因文库载体；但需用XhoI和NcoI消化载体。
7. 连接已消化的PCR产物和已消化的载体，并电转化到大肠杆菌TG1中，构建轻链改组文库。
