[器材和试剂]
● PCR试剂和设备
● cFv基因文库单链模板DNA,制备自pHENl中的天然scFv文库（10ng/u1）
● Gelleclean试剂盒（Qbiogene）
● Wtzard PCR纯化试剂盒（ProlneSa）
● RJHl/2Xho引物： 5'-GGC ACC CTG GTC ACC GTC TCG AGT GGT GGA-3'
● RJH3Xho引物： 5'-GGG ACA ATG GTC ACC GTC TCG AGT GGT GGA-3'
● RJH4/5Xho引物： 5'-GGA ACC CTG GTC ACC GTC TCG AGT GGT GGA-3'
● RJH6Xho引物： 5'-GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCG AGT GGT GGA-3'
● FdSEQl引物
● pHENl-Vλ3载体DNA（可以根据 MTA）
[方法]
1. 配制4个独立的50ul PCR反应混合液， 包含：
● 水，35.5ul
● 20XdNTP（每种5mmol/L），2.5ul
● 10XVent聚合酶缓冲液，5.0ul
● FdSEQl引物 （10pmol/u1），2.5ul
● 反向引物（10pmol/u1），2.5ul
● 单链scFv模板DNA（10ng），1.0ul
● Vent DNA聚合酶（2单位），1.0ul
2. 在有加热盖的热循环仪内加热反应混合液到94℃5分钟。
3. 以94℃30秒、42℃30秒、72℃1分钟的条件共循环25次，扩增VL基因。
4. 用Wizard PCR纯化试剂盒纯化PCR产物。
5. 用XhoI和NotI消化PCR产物；但除了用XhoI替代 NcoI,还需用NEB2缓冲液和BSA,按照厂家要求进行。
6. 用XhoI和NotI消化pHENl-VL3载体DNA;但不要用XhoI替代NcoI.
7. 连接已消化的PCR产物和已消化的载体，并电转化到大肠杆菌TGl细胞中，构建4个VL基因噬菌体文库。测定文库容量并将细菌性文库材料储存于-70℃。
8. 用含甘油文库储存材料细菌接种到含100ug/ml氨苄青霉素和1%葡萄糖的100ml 2X TY培养基中，制备每种VL基因文库DNA.接种量应足够大以保证接种细菌数至少比文库容量大5倍。过夜培养后，按标准的DNA质粒制备方法进行操作。为了续后进行文库消化，可合并不同文库的DNA.
