体内DPSCs的成牙和成骨分化
试剂和材料：
1. 无镁和钙的PBS平衡盐溶液（PBSA）；
2. MSC培养基：含2mmol/L 谷氨酰胺的α-MEM，添加15%胎牛血清，0.1mmol/L左旋抗坏血酸磷酸盐，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；
3. 胰蛋白酶-EDTA溶液：0.05%胰蛋白酶，0.54mmol/L（0.2%）EDTA，无镁和钙的PBS平衡盐溶液溶解；
4. 冻存管，1.8ml；
5. 合适的载体（羟基磷灰石/磷酸三钙载体，HA/TCP）；
实验方法：
1. 用MSC培养基培养，直到细胞到达90%汇合；
2. 用PBSA洗培养皿，洗3次；
3. 加足够体积的胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育；
4. 确定80%的细胞已从培养容器表面脱离，然后加MSC培养基；
5. 500g，离心6min；
6. 倒掉上清，用MSC培养基重悬细胞；
7. 细胞计数；
8. 将重悬于MSC培养基的（2-4）×106个细胞和载体混合，置于1.8ml冻存管中；
9. 37℃旋转孵育1h；
10. 无菌条件下，将混合物移植到免疫力低下的小鼠皮下。我们通常使用N1H的bg-nu/nu-xid小鼠进行移植；
11. 在合适的时间点，收集移植物，组织学检测。（在HA/TCP载体和bg-nu/nu-xid小鼠体系中，8周的时间足够DPSCs和SHED形成充分的矿化基质。收集的时间点主要决定于体系。）
来源：武汉原生原代生物医药科技有限公司
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