1 材料
1.1 动物:孕16 d SD 大鼠。
1.2 液体配制:硼酸硼砂缓冲液：0.05 M 四硼化钠45 ml，0.2 M 硼酸55 ml，pH8.4；胰酶-EDTA 消化液(胰酶0.125 g，EDTA 0.2g，D-Hanks’平衡盐液定容至100 ml)；所用的培养板、培养瓶或玻片预先经100 μg/L 多聚赖氨酸硼酸盐缓冲液于37℃包被4 h，三蒸水洗三遍晾干备用。
2 方法
操作步骤如下：
2.1 孕16d SD 大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks’平衡盐液中；
2.2 在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20 min，中间摇晃一次；
2.3 随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM＋10%FBS)的离心管内终止消化液作用5 min；
2.4 用滴管吸出组织转移到装有预冷的DMEM＋10%FBS 的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤2～3 次；
2.5 将所收集的上清经 200 目筛网过滤；
2.6 过滤后的细胞悬液于800 rpm 离心5 min，弃上清，管内加入新鲜培养液(DMEM＋20%FBS)并吹打成单细胞悬液；
2.7 细胞计数，调整细胞密度按1.5×105/cm2种入6 孔板内，放入CO2孵箱中培养。培养48h后换液并加入Ara-C使其终浓度为1×10-5 mM/L。Ara-C作用24 h后全量换液。以后每隔3 天半量换液一次；
3 讨论
注意事项如下：
3.1 上面的步骤是传统方法。有许多地方可以进行改动：如消化时可以直接用0.125-0.25%的胰酶消化15-20 min 左右，也可用DNA 酶进行消化，有人还直接进行吹打，都可行。
3.2 上面虽然时大鼠皮层神经元，但是同样适用于小鼠，但是应该选择 孕 13 d 左右的小鼠。
3.3 神经元是一种比较难培养的细胞，因此在接种时细胞的密度一定要够。
3.4 在玻片上培养神经元时，一定要注意玻片的来源和处理方法，这个非常重要，对神经细胞的影响是很大的。如果您现在在玻片上培养的神经元生长情况还不错的话，那么您在以后的培养中最好还是用同一来源(厂家)的玻片。
3.5 如果有 B27 和neurobasal 培养基，那么就方便了(不用加AraC):
1)把细胞悬液用(DMEM＋20%FBS)悬浮，种到培养皿上6－12 h 后，全量换成2% B27 的neurobasal 培养基，继续培养，3 d 半量换液。
2)把细胞悬液用直接用2% B27 的neurobasal 培养基悬浮接种。
3)可以用新生1 d 内的胎鼠皮层直接培养。
