1 材料
1.1 滑膜组织：将外科手术切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中，在手术完成时将标本放入PBS 冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室。
1.2 试剂：4 mg/mlⅠ型胶原酶(α-MEM 配制)，培养液(含10%胎牛血清的α-MEM)。
1.3 器械：手术器械。
2 方法
2.1 将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中(静止)，在手术完成时将标本放入PBS 冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室；
2.2 在超净台中将标本放入培养皿中，加入α-MEM 洗涤；
2.3 获得组织切开，仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织，附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化)，仔细剔除脂肪组织，用α-MEM 洗二次(以去除红细胞)，放在小青瓶中用解剖剪锐性切碎
2.4 用双倍获得组织的体积含有4 mg/mlⅠ型胶原酶的α-MEM消化37℃孵育120 分钟(在此期间震动混匀数次)；
2.5 30 分钟后收集第一管细胞：细胞悬液经70 μm 细胞滤网过滤，用1500-2000 转离心6 分钟，上清为Ⅰ型胶原酶加入未过滤网的组织，继续用于消化；
2.6 离心管底细胞用α-MEM 离心洗涤2 次，每次用α-MEM 重悬浮后用1500-2000 转，离心6 分钟，最后一次用记数板观察到有细胞。细胞最终悬浮于含有10%胎牛血清的α-MEM 中，接种到培养瓶中培养。
2.7 60 钟后收集第二管细胞：细胞悬液经70 μm 细胞滤网过滤，用1500-2000 rpm 离心6 分钟；用α-MEM 洗2 次，每次用α-MEM 重悬浮后用1500-2000 rpm 离心6 分钟，最后一次用记数板观察细胞并计数。细胞最终悬浮于α-MEM 含有10%胎牛血清中，接种到培养瓶中培养。
2.8 必要时可做第三管细胞收集；并立即作原代滑膜细胞培养。
2.9 每2-3 天换液一次。
3 讨论
3.1 虽然国内外文献有组织块培养法获得滑膜细胞，但作者试验过，没有获得滑膜细胞，可能方法没掌握好或实验条件不同；
3.2 我探索过用0.25% trypsin 或0.25% trypsin＋ 0.02% EDTA 或 collagenaseⅠ或collagenaseⅡ消化细胞或合用，只有单用 collagenaseⅠ有用、最好；
3.3 机械法很难获得细胞；
3.4 全培用α-MEM 或RPMI1640 或DMEM，加10%胎牛血清。不能用小牛血清，胎牛血清用国产即可；
3.5 必须用Ca2+-free的PBS。
