1 材料
猪甲状腺由锦州市屠宰场提供。F-12 培养基(Sigma 公司)；胎牛血清(天津血液研究所)；胰蛋白酶(Sigma 公司)；胶原酶Ⅳ(Sigma 公司)；牛TSH(Sigma 公司)
2 方法
杀猪后迅速取出甲状腺 1～2 个，置于盛有75%酒精的烧杯中，用冰盒送至实验室(1 h以内)。立即置于pH为7.4 的PBS缓冲液(含青链霉素)中，反复漂洗，直至漂洗液清澈透明。去除包膜及结缔组织，用眼科剪子、镊子将甲状腺组织剪成１mm3大小的碎块。置含0.25%胰酶和300 U/ml胶原酶的容器中，放于37℃温箱中消化60 min，每隔15 min需摇动一次。用吸管将上清液的三分之二吸入离心管中，并加入含有胎牛血清的培养基终止消化。以1000 rpm离心10 分钟后，弃上清。将细胞沉淀用F-12 培养基制成细胞悬液，充分吹打并用不锈钢网(200 目)过滤，再以1000 rpm离心10 分钟，弃上清。沉淀悬于含15%胎牛血清和１ U/L牛TSH的F-12 培养基中，台盼蓝染色证明活细胞数大于95%，调整细胞浓度接种于培养板中(１ml/孔)。置于37℃的5% CO2孵箱中，每2-3 天换液一次，至细胞融合成片后用于实验。
3 结果
猪甲状腺细胞培养 24 小时，镜下细胞贴壁，呈聚集生长，细胞呈圆形或椭圆形。
图1 培养24小时后的猪甲状腺细胞
4 讨论
胰蛋白酶适于消化细胞间质较少的软组织如上皮组织、肝、肾等，对传代细胞也非常好。但消化纤维性组织或较硬的癌组织则效果较差。胶原酶对胶原有很强的消化作用，适于消化纤维性组织、上皮组织以及癌组织等。由于甲状腺富含纤维性组织，所以甲状腺的消化分离一般采用胶原酶与胰蛋白酶联合消化法，用单一的胰蛋白酶消化效果一般；促甲状腺激素(TSH)是培养甲状腺细胞必备的，它能够起到促进甲状腺细胞生长的作用。本人也曾尝试过不加TSH，与加TSH 对比明显可见细胞增长较慢，且形态不好。
