大鼠主动脉平滑肌细胞(smooth muscle cell)培养(贴块法)

2010-02-22 11:21 · cheng

1 材料 手术剪 1 把、手术钳2 把、眼科剪刀2 把、眼科镊子 1 把、大头针4 个、手术刀片、无菌1×PBS 约500 mL,含20% FBS 的DMEM、5 mL 小皿3 个、 10 mL 大皿1 个、杀鼠板1 块。(以上均为无菌物品)。 2 方法 1. SD 大鼠

1 材料

手术剪 1 把、手术钳2 把、眼科剪刀2 把、眼科镊子 1 把、大头针4 个、手术刀片、无菌1×PBS

约500 mL,含20% FBS 的DMEM、5 mL 小皿3 个、 10 mL 大皿1 个、杀鼠板1 块。(以上均为无菌物品)。

2 方法

1. SD 大鼠(150-200 g),断头,浸入75%的酒精中15 min;

2. 置入超净台中,将大鼠固定于杀鼠板上,在无菌条件下打开腹腔,分离出胸主动脉、腹主动脉,摘出;

3. PBS 清洗3 遍,剥去外膜,用手术刀片刮去内膜,留下中膜并将其移入1 mL 的培基中、剪成1×1mm 大小组织块;

4. 再将PBS清洗组织块,移入25 mL的培养瓶中,用尖嘴弯管均匀贴好组织块,放入37℃、5% CO2的培养箱倒置培养6 小时后,待组织块贴壁后,再加入2.5 mL培养液后放回培养箱中;

注意:最后加入 2 mL 培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下,勿使组织块吹下。

5. 随后每 3 天予以全量换液。

3 结果

3-5 天后可见组织块周围有细胞爬出,大约2 周后80-90%融

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