1 材料
手术剪1把、手术钳2把、眼科剪刀2把 、眼科镊子1把、大头针4个、手术刀片、无菌1×PBS约500 mL,含20% FBS的DMEM、5 mL小皿3个、 10 mL大皿1个、杀鼠板1块。(以上均为无菌物品)。
2 方法
1. SD大鼠(150-200 g),断头,浸入75%的酒精中15 min;
2. 置入超净台中,将大鼠固定于杀鼠板上,在无菌条件下打开腹腔,分离出胸主动脉、腹主动脉,摘出;
3. PBS清洗3遍,剥去外膜,用手术刀片刮去内膜,留下中膜并将其移入1 mL的培基中、剪成1×1 mm大小组织块;
4. 再将PBS清洗组织块,移入25 mL的培养瓶中,用尖嘴弯管均匀贴好组织块,放入37℃、5% CO2的培养箱倒置培养6小时后,待组织块贴壁后,再加入2.5 mL培养液后放回培养箱中;
注意:最后加入2 mL培养液时应使其顺无组织块的皿边缘缓慢流下,勿使组织块吹下。
5. 随后每3天予以全量换液。
3 结果
3-5天后可见组织块周围有细胞爬出,大约2周后80-90%融合。