聚蔗糖-泛影葡胺法分离嗜碱性粒细胞

2010-02-23 15:23 · Zara

【试剂及配制】 (1) 聚蔗糖-泛影葡胺分层(D=1.085) (2) HEPES-ACM缓冲液:HEPES 25mmol/L中含CaCl2 1mmol、 NaCl 130mmol、 KCl 5mmol、 MgCl2 1mmol,用1mol/L NaOH调节至pH7.4。

【试剂及配制】

(1) 聚蔗糖-泛影葡胺分层(D=1.085)

(2) HEPES-ACM缓冲液:HEPES 25mmol/L中含CaCl2 1mmol、 NaCl 130mmol、 KCl 5mmol、 MgCl2 1mmol,用1mol/L NaOH调节至pH7.4。

(3) 无Ca2+、Mg2+Hank’s液

【操作方法】

(1) 取肝素抗凝血3ml,与等体积的HEPES-ACM缓冲液混匀后,叠加在3ml密度为1.085的分层液上,2000r/min 离心20min。

(2) 吸取中间层白细胞,用无Ca2+、Mg2+ Hank’s液洗2次,每次1200r/min离心10min。弃上清,

(3) 调整细胞浓度,涂片染色计数,嗜碱性粒细胞纯度大于90%。

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