〔摘要〕 目的 建立一种简便有效的体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs) 的方法。研究MSCs 的生物学特性, 为血管组织工程提供理想的种子细胞。方法 贴壁培养法分离纯化大鼠MSCs体外培养和连续传代, 在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化; 利用MTT法测定MSCs的生长曲线; 行免疫组化方法鉴定MSCs膜抗原; 分别加成骨、成脂肪诱导剂后MSCs体外培养1到3周, 分别做碱性磷酸酶(ALP) 、Von Kossa染色及油红O染色, 观察细胞形态变化、成骨及成脂肪分化结果。结果 MSCs体外培养生长状况良好, 呈均一的成纤维细胞样, 表达波形蛋白(Vimentin) 、 α2平滑肌肌动蛋白(α2SMA) , 不表达层粘连蛋白(Laminin) 、CD34、V III因子相关抗原(V III) 。经体外诱导后具有多向分化潜能。结论 贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSCs, 用此方法培养的细胞生长稳定, 增殖能力活跃, 具有MSCs的一般生物学特性, 为其成为血管组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持。
〔关键词〕 间充质干细胞; 骨髓; 贴壁法分离培养; 种子细胞
近年来血管组织工程学取得了较大的进展, 它是将种子细胞种植于三维血管支架上, 使之黏附、分化、生长, 并分泌细胞外基质, 来构建具有生命力的血管替代物。其中种子细胞分离纯化、培养扩增的研究是其构建的关键步骤。骨髓中除造血干细胞外, 还有一类间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs) , 是中胚层发育的早期细胞, 具有取材方便, 在体外培养能保持其多向分化潜能, 在体外将MSCs种植于生物活性材料上能很好的扩增, 传代过程中遗传背景稳定, 同种异基因的MSCs移植没有免疫排斥等特点而有望成为血管组织工程种子细胞的主要来源。
