一、实验目的：
1、为细胞融合准备SP2/0小鼠骨髓瘤细胞；
2、杂交瘤细胞的扩大培养（种腹水），或传代培养。
二、实验原理：
小鼠骨髓效力细胞株（NSI，SP2/0）和杂交瘤细胞均具有无限生长繁殖的能力，它们都属于半贴壁细胞，不用胰蛋白酶或EDTA消化液，只需轻轻冲洗瓶壁上的细胞便可脱落。因而可以利用这些特性对这类细胞进行连续传代培养，以为实验提供生长旺盛的细胞（对数生长期的细胞）。
三、实验材料：
SP2/0细胞（或杂交瘤细胞）
CO2培养箱、细胞培养瓶（25、50、100毫升）、弯头滴管、消毒用套筒（玻璃或铜质）、吸头、RPMI-1640完全培养基、倒置显微镜、试管架、酒精灯、灭菌高压锅。
四、实验步骤：
1、复苏的或转瓶的传代细胞，使细胞浓度大约为5×104/毫升，置37℃5%CO2培养箱中培养。
2、培养48小时后，可见部分细胞贴壁生长，而部分细胞呈漂浮状态，可用滴管吸去漂浮的细胞，加入少量新鲜培养基继续培养24小时以上。
3、若细胞生长过密，则需及时冲下并吸出部分细胞，或将吸出的细胞转瓶扩大培养，如果不是这样处理，细胞很易出现衰老、死亡现象，对于杂交瘤来讲，这样更易诱发阳性克隆丢失可能性。
4、用于细胞融合的骨髓细胞，必须在生长繁殖的对数期（约105细胞/毫升），而且细胞形态规则要一致（圆而亮，有一定的立体感），机能要活跃，活细胞数在90—95%以上。要得到这种细胞，其培养技巧在于，在融合前24小时，将生长良好的细胞全部自瓶壁冲下来，并除去1/2或更多的细胞，加入新鲜培养液令细胞重新贴壁分裂增繁。
5、作为长期在体外传代培养的细胞，为减少工作量，可采用8—10%小牛血清的培养基，这样细胞的繁殖速度亦慢，一般可间隔3天更换一次培养液。
6、本试验要求各组将细胞自小瓶转入中瓶再转入较大的培养瓶中生长，并用对数增长期的细胞用于冻存和复苏实验（见实验六）。
五、结果观察：
1、细胞传代前后的生长状态及速度的观察；
2、细胞转瓶后生长情况观察；
3、了解生长良好，一般及较差细胞的显微镜下观察；
4、传代细胞培养的体会。
六、注意事项：
1、连续细胞传代培养更应注意无菌操作；
2、传代时机对于细胞生长的状况及速度十分重要，尤其要注意不能等细胞出现老化后再传代，那样做一般结果并不如愿；
3、传代转瓶时细胞量的取舍主要根据细胞量的多少，生长条件优劣以及个人实践经验而决定；
4、用于冻存、融合、传代的细胞都要求是处于对数增长期的细胞，不能勉强 为之。
