一、实验目的
1.了解原代细胞培养的基本方法和操作过程。
2.熟悉原代培养细胞观察方法。
二、实验原理
用直接从机体获取的细胞进行的培养称为原代培养。这种培养过程主要是采用无菌操作的方法，把组织（器官）从动物体内取出，经酶消化处理，使分散成单个细胞，然后在人工条件下培养，使其不断地生长和繁殖。原代培养是建立各种细胞系的第一步。由于原代培养的细胞刚从活体组织分离处理，所以在一定程度上能反映生物体内的生活状态。利用原代培养技术可以在体外进行各种类型细胞的增殖、遗传、变异、分化和脱分化、恶变与去恶变等研究。原代培养可分为组织块培养法和消化法两种。
三、实验仪器、材料和试剂
仪器、用具：生化培养箱、倒置显微镜、超净工作台、高压锅、恒温水浴箱、离心机、眼科剪、眼科镊、蜡盘、离心管、培养瓶、纱布、培养皿、微量加样器、吸管、移液管、酒精灯、酒精棉球、试管架等。
材料：家蚕蚕卵。
试剂：
D-Hanks液（即为无钙、镁离子的Hanks液）、0.25％胰蛋白酶液、TC-100培养基（GIBCO公司）、2％新洁尔灭消毒液、Grace培养基（GIBCO公司）、胎牛血清。
四、实验步骤
1.将蚕卵用2%新洁尔灭溶液消毒，再用75%酒精棉消毒，晾干；
2.用酒精棉对双面刀片和眼科剪进行消毒；
3.取适量培养基于较大的培养皿中，用双面刀片削开卵壳，尽量保持胚胎的完整性，用短吸管吸取培养基将卵内的胚胎吹出；
4.再取适量培养基于小培养皿中，用短吸管将吹出的完整胚胎吸取至小培养皿。
5.重复4步两次；
6.最后将胚胎吸取到盛有少量培养基的小烧杯中，用眼科剪将胚胎剪到适合大小；
7.用0.25％胰蛋白酶处理10－20分钟，形成絮状沉淀，用长吸管除去胰蛋白酶，新鲜培养基润洗沉淀1－2次，加适量培养基于小烧杯中，用长吸管打散沉淀制成悬浮液，培养基与胎牛血清按5：1的比例加入；
8.吸取悬浮液到25ml细胞瓶中，置于28℃生化培养箱中培养。于第三天换液，以后视细胞生长情况处理。
