银染(silver staining)操作规程

2010-04-09 14:41 · jing

实验原理:在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。 试剂:乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨

实验原理:在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。

试剂:乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛

实验操作程序:

固定:30min或者更长时间

100ml 乙醇 40% 乙醇

25ml冰醋酸 10% 冰醋酸

加水到250ml

致敏:30min

75ml 乙醇 30% 乙醇

17g 乙酸钠 28.2g 三水乙酸钠

0.5g硫代硫酸钠

加水到终体积250ml

水洗:3 x 10min

银染:20min

0.625g AgNO3

100 ul 37% 甲醛

加水到终体积250ml

水洗: 2 x 1 min (注意把握时间,水洗时间长显色速度慢,点的颜色偏黄色)

显色:视情况而定

6.25 g Na2CO3

50 ul 37% 甲醛

加水到终体积250ml

终止:10min

3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸

加水到终体积250ml

保存:1% 冰醋酸,4 ℃

注意事项:

1.固定时间较长,则加一步水洗 30min,以免胶太脆而破碎。

2.甲醛在使用前加入。

3.最好多配制一份显色液,第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液,显色到点清晰。

4. 显色过程很快,要注意把握时间,避免染色过度。

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