问 题
可能原因
建议解决方法
推荐电压条件下电泳时间过长
电泳缓冲液过稀
配制新鲜缓冲液,使用1X稀释液
推荐电压条件下电流过高,热量过大
电泳缓冲液过稀
配制新鲜缓冲液,使用1X稀释液
推荐电压条件下电流过低或无电流
接触不良
在电泳前移除胶盒底部的封条;确认缓冲液没过加样孔;检查buffer core上导线连接
蛋白带型条状(streak)
上样过量
样品中盐浓度过高
降低蛋白上样量通过透析或凝胶过滤降低样品中的盐浓度
样品沉淀
加大样品中SDS的浓度
样品中的污染,如脂类或DNA 复合物
离心或过滤样品以除去特定污染
制胶不佳
确保灌胶均匀,一次完成
条带模糊
蛋白样品部分变性
完全变性蛋白
蛋白样品部分还原
确保加入足够量的DTT或β巯基乙醇。
电泳时间过长
观察前面的指示剂染料,掌握恰当的电泳时间。
哑铃形条带或
“微笑”条带
上样体积过大导致不完全堆积
使用恰当的上样体积,如果样品过稀,使用超滤浓缩。
电泳过程中电场不均匀
如果蛋白浓度已知,上样时确保对称。
分离胶表面不平
在制胶时使分离胶表面水平。
凝胶过期
在指定的失效期前使用凝胶。