聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE胶的配制

 

各种浓度PAGE胶的配制（DNA电泳用）

50ml体系：

丙烯酰胺	有效分离（bp)	二甲苯青	溴酚蓝	丙烯酰胺30%（ml）	10×TBE（ml)	ddH2O（ml）	> > TEMED（µl）	>>过硫酸铵10%（µl）
3.5%	100-1000	460	100	5.83	5	39.17	25.0	250
5.0%	100-500	260	65	8.33	5	36.67	25.0	250
8.0%	60-400	160	45	13.33	5	31.67	25.0	250
12.0%	40-200	70	20	20.0	5	25.00	25.0	250
15.0%	25-150	60	15	25.0	5	20.00	25.0	250
20.0%	5-100	45	12	33.33	5	11.67	25.0	250

5ml体系：

丙烯酰胺	丙烯酰胺30% （ml）	10×TBE （ml）	>>ddH2O （µl）	>>TEMED （µl）	过硫酸铵10% （µl）
3.5%	0.583	0.5	3.917	2.5	25
5.0%	0.833	0.5	3.667	2.5	25
8.0%	1.333	0.5	3.167	2.5	25
12.0%	2.00	0.5	2.5	2.5	25
15.0%	2.50	0.5	2.0	2.5	25
20.0%	3.333	0.5	1.167	2.5	25

1、丙烯酰胺30%为29：1（质量比，丙烯酰胺：双甲叉丙烯酰胺）

2、TEMED 可以加到1ul/ml。

不同浓度丙烯酰胺和DNA的有效分离范围表

 

丙烯酰胺(%)	有效分离范围(bp)	溴酚兰*	二甲苯青*
3.5	100～2000	100	460
5.0	80～500	65	260
8.0	60～400	45	160
12.0	40～200	30	70
15.0	25～150	15	60
20.0	10～100	12	45

*表中给出的数字为与指示剂迁移率相等的双链DNA分子所含碱基对数目(bp).

凝胶的制备过程：

1、 按要求装配好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边，防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。

2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45～60℃角。

3、 按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。

4、 加入TEMED后，立即混匀，缓缓倒入两玻璃板间的胶床中，直到液体接近溢出时为止。

5、 立即插入适当的梳子，密切注意防止梳齿下产生气泡，用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上，然后将玻璃板斜靠在物体上，使成10°角，可减少液体泄漏的机会。

6、 室温聚合一小时后，将玻璃板插入电泳槽中，上紧，倒入0.1XTBE缓冲液。

7、 小心取出梳子，加样。