一、实验方法
1、鸡基因组DNA的提取
2、目的基因的PCR扩增
3、内切酶消化PCR产物
4、琼脂糖凝胶电泳（检测基因型）
鸡DNA的获取
1、鸡翅下静脉采集全血；2%EDTA抗凝；
2、DNA提取：
裂解细胞核（红细胞+白细胞）
↓
酚-氯仿去除蛋白质
↓
酶解RNA
↓
获取DNA
PCR扩增
1、引物设计（Genbank）；
2、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）
PCR反应体系
DNA模板
dNTP
Taq DNA聚合酶
引物
Mg2+
缓冲液
PCR反应程序
预变性 94℃ 3~5min
35循环：
变性 94 ℃ 30s~1min
退火 50~65 ℃ 30~60s
延伸 72 ℃ 1~2min
后延伸 72 ℃ 5~10min
PCR产物电泳检测结果
内切酶消化PCR产物
实际操作环节>>
琼脂糖凝胶电泳检测基因型
二、实验原理
电荷效应：DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
分子筛效应：与分子大小及构象有关，由于DNA分子或DNA片段的分子量差别，电泳后呈现迁移位置的差异。
条带类型对应于基因型。
三、实验目的>
>>>通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电泳技术、DNA的分离鉴定及基因型判定方法。
四、实验材料、仪器和试剂
材料：DNA样品
仪器：电泳液、水平凝胶电泳槽、移液器、紫外透射仪、Tip头
试剂
电泳缓冲液(1×TAE)：0.04mol/L三羟甲基氨基甲烷-乙酸(tris-乙酸)，0.01mol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA)
溴化乙锭(EB10mg/ml)：100ml灭菌双蒸水中加入1g EB
1%琼脂糖：100ml 1×TAE加入1g琼脂糖
上样缓冲液(溴酚蓝-甘油溶液)：先配制1%的溴酚蓝水溶液与等体积的甘油即可
五、实验步骤
(一)制胶
1.将1.0g琼脂糖加至100 ml 1×TAE缓冲液中，配成1%琼脂糖。琼脂糖在微波炉中加热熔化。灌胶前将琼脂糖冷却至60。C以下。
2.加入5ul溴化乙锭（终浓度0.5ug/ ml ）至熔化的琼脂糖液中混匀，但避免出现气泡。
3.准备好凝胶成型器。
4.将冷却的琼脂糖倾入用凝胶成型器，制备凝胶。
5.在凝胶一侧放入成型梳，将梳子夹在胶上方的桥上，并保证梳齿在塑料板稍上一点，但不要接触塑料板。
6.待胶变硬，直到它呈乳白状且不透明（约20分钟），轻轻去除梳子。配制2L 1×TAE缓冲液，用于电泳槽。将缓冲液到入洁净的凝胶槽。
（二）电泳
1.将凝胶塑料板水平放置在电泳槽中。
2.凝胶应完全侵入缓冲液，但覆盖的缓冲液不要超过1cm。
3.取5ul样品加入上样缓冲液，小心的将样品加入每一样品槽内
4.接通电源，电压4-5V/cm，DNA从负极移到正极。时间30-40分钟。
5.关掉电源，结束电泳。
六、结果分析>
>1.>将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统的平台中间>>
2.开通紫外光，在电脑中观察图像；>>
3.关上紫外光电源，在电脑中编辑和保存图像；>>
4.根据图像结果判定不同个体基因型。
