材料：
（1）急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分离的汉坦病毒
（2）引物：
引物
序列（5’～3’）
位置
片段（bp）
逆转录引物
TAGTAGTAGACTCC
1~14
LMS
通用外引物
AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG
1910~1939
M(+)
GTACAICCTGTRCCIACCCC
2373~2354
M(-)
型特异性引物
汉滩病毒
GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC
1958~1984
M(+)
GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC
2318~2340
M(－)
汉城病毒
GTGGACTCTTCTTCTCATTATT
1936~1957
M(+)
TGGGCAATCTGGGGGGTTGCATG
2331~2353
M(－)
S片段引物
ATGTTGCCTGGGGIAAAGAGG
1200~1220
S(+)
GCGCACTAGTAGTAGTAGACTCCCTAAAGA
1670~1696
S(-)
方法：
（1）病毒RNA的提取：采用TRIzol按说明提取，制备模板RNA；
（2）逆转录、合成cDNA：采用 SuperScripTMII或AMV逆转录酶，按说明书进行；
（3）PCR扩增：反应条件为95℃预变性10分钟，94℃60秒、55℃60 秒、72℃45秒、扩增30～35个循环，72℃延伸12分钟。
（4）扩增产物用1～2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。若条带的分子量与预期片段大小相同，则表明为特异性扩增产物。
必要时，可进行：
（5）PCR片段的回收和核苷酸序列测定：切下特异分子量条带，用QIAquick凝胶回收试剂盒回收（按其说明书进行），自动测序仪测序。
意义：扩增到特异性条带可确诊汉坦病毒并明确其型别，序列测定还可以对汉坦病毒的变异情况进行研究。
