实验原理：
PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶链式反应，可以选择性扩增一段DNA序列。其基本步骤是，首先将待扩增的模板DNA变性使之成为单链，DNA样品中，特异性的引物能够与其互补的序列杂交，在dNTPs和Taq酶存在时，就可以合成模板 DNA的互补链，反应完成后，将反应混合物加热使DNA双链变性，温度下降后，过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。这种延伸—变性—退火—延伸的循环可以重复多次，使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。
1.变性：加热使模板DNA在高温下（94℃）变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链.
2.退火：使溶液温度降至50～60℃，模板DNA与引物按碱基配对原则互补结合.
3.延伸：溶液反应温度升至72℃，耐热DNA 聚合酶以单链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合
物中的4种脱氧核苷三磷酸（dNTPs），按5ˊ→3ˊ方向复制出互补DNA.上述3 步为一个循环，即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。从理论上讲，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25～30个循环后DNA可扩增106～109倍。典型的PCR反应体系由如下组分组成：DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两个合成的DNA引物、耐热Taq聚合酶。
仪器、实验用品、试剂
一、仪器<
PCR仪
冰箱
电泳仪
微波炉
电泳槽
离心机
紫外检测仪
二、试剂<
PCR Buffer
TAE(500ml)
Ice
琼脂糖
Tag
溴化乙锭
www.bbioo.com
d NTPs
溴酚蓝
模板DNA
marker
Primer1
Primer2
石蜡油
三、其它用品<
移液器 （一套）
Tip（一套）
PCR管 (0.2ml)
防护眼镜
一次性手套
胶带
实验步骤
时间安排：
上午10：30配反应体系
中午PCR
下午电泳
PCR（范提供）反应体系
电泳配制1％琼脂糖凝胶，取10ul扩增产物电泳分析PCR结果
bf:KCl50mmol/L促进引物退火
Tris.HCl10-50mmol/LPH8.4
BSA100ug/ml（乙酰化的BSA）对酶有保护作用
Mg离子:1.5-2mmol/L
1.与dNTP结合（PO4离子）
2.与引物中的EDTA结合
3.与模板中的EDTA结合
4.Taq活性需要游离的 Mg离子
购dNTP为25um,需稀释10倍至2.5um
Primers:
Boo12F10D
Boo14R10D
分子量24bp*324.5=7788
质量数10D＊33＝33ug
摩尔数33／7788＝4.2nmol
浓度4.2nmol/84ulH2O=50um
取母液（50um）1ul加水至5ul,稀释5倍，则终浓度为10um
几种常用反应体系：
1. 在0.2ml Eppendorf 管内配制25ul反应体系 (华美PCR kit)
混匀离心50ul石蜡油离心
PCR程序94℃5min
94℃1min
60℃1min
72℃1min
30cycle
72℃5min
琼脂糖凝胶电泳分析PCR结果配制1％琼脂糖凝胶，取10ul扩增产物电泳。
