100853 北京 解放军总医院 刘芙进 卢世璧 王 岩 孔令占 郭义柱
关键词 电泳,琼脂糖凝胶;显微摄影术
拍摄前准备:在相机的机身(Nikon F3) 与镜头(Nikon Micro2 Nikkor F = 50mm)之间加上能使装载标本的琼脂糖充满取景画面的近摄接圈,镜头前要加装红滤色镜,装好黑白胶卷,再将照相机固定在翻拍架上。其次将紫外光灯箱的屏面向上,平放在翻拍架的平台上。再将电泳的琼脂糖凝胶平放在紫外光灯箱的屏面上。最后打开稳压电源的开关,即可进行拍摄。
拍摄结果:胶片宽容度所具有的按比例记录亮度范围的能力,得到了充分的发挥。最大密度部分的密度已经很浓重,而琼脂糖凝胶与灯箱屏面的交接线很容易辨别。标本条带部分的影级层次,几乎没有任何损失。高光部分的亮度也得到了良好的体现。
作者用上述方法拍摄的耐药基因MDR21 及其他DNA 琼脂糖凝胶电泳标本,可见曝光精确、反差适宜、影级层次丰富、银盐颗粒微细、标本条带清晰。
操作过程中要注意下列问题:
①防震避光,因琼脂糖凝胶电泳拍摄曝光时间长,应防止相机及标本震动,防止拍摄中杂散光的干扰。
②中心合轴与平行调节,在固定相机与琼脂糖位置的同时, 要注意镜头主光轴的垂直,琼脂糖的中心要摆放在镜头主光轴的垂线上,镜头与标本两个面要平行,否则将会产生以下两种现象: 因透视作用产生图像变形;画面的局部不实。
③曝光时要兼顾到有足够的景深范围和倒易律失效的问题。因像距的增加,到达感光面的通光量就必然下降,作为光源的紫外光灯箱的亮度也有局限;还必须收缩一定的光圈系数来提高影像的清晰度。由于以上多种因素的制约,曝光的时间就必然要延长。如果曝光时间超过了倒易律的允许范围,拍摄画面的影调层次将会受到损失,影像的反差也会发生变化。要想既保证影像的清晰度,又保证画面的影调层次,光圈与快门的组合就显得尤为重要。作者曝光时的相对孔径一般控制在F8～11 之间,曝光时间采取B 门手工控制在4s 左右。
④只有把曝光的时值控制精确,胶片宽容度按比例记录亮度范围的能力才能得到充分的发挥。如用手工控制快门的速度, 就有一个曝光时值的精度问题需要解决。我们解决这个问题的办法是:用一个暗室定时钟,上足发条后,放在翻拍架的旁边。曝光时用眼晴看着定时钟的表盘,当快门掀动的同时,观察表盘上秒针所走时值刻度的多少。当秒针走到符合曝光所需要的时值刻度的同时,关闭快门。采用这种方法控制曝光时值的精度是较为精确的。我们经过多次重复曝光实验,胶片经过标准条件的冲洗,没有发现胶片密度有不一致的现象。
⑤拍摄时所用的胶片应选用感光度较高的全色胶片。作者使用Lucky PANISO100/ 21°黑白全色胶卷,拍摄效果比较满意。
⑥标本条带是橙红色的,拍摄时镜头前还要加红滤色镜,所以忌用感色范围狭窄的胶片(分色片、色盲片) 。
⑦胶片的冲洗选用D276 微粒显影液,显影药温20 ℃,显影时间 8min。在冲洗时尽量做到精确的定时定温,以此来保证胶片冲洗质量的稳定。
