限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的DNA水解酶,这类酶的发现和应用促进了以DNA重组为基础的生物工程技术的迅猛发展。该类酶是体外剪切基因片段的重要工具，基因物理图谱的绘制、核苷酸序列的测定、基因片段的重组，重组子的筛选、探针的制备及各种杂交、测量基因的拷贝数,基因文库构建,分子标记等都离不开限制性内切酶的应用。另外以限制性内切酶为基础的各种限制性内切酶片段长度多态性分析，促进了分子遗传学、分类学等相关学科的应用和发展。可以这么说，没有限制性内切酶的发现和应用就没有现代意义上的分子生物学、分子遗传学，也就不会有任何基因工程产品。而对于从事分子生物学或相关领域研究工作的人员讲来，如果不能很好地了解和掌握内切酶技术，那就根本不可能开展这方面的任何工作。
本部分实验主要通过EcoRⅠ，Hind III两种限制性内切酶对λDNA的单酶切、双酶切及部分酶切的操作，使学员能掌握内切酶的实验操作技术
一：仪器：
离心机 、 恒温水浴 、取液器、 电泳仪 、电泳槽、 紫外观测仪
二：试剂
EcoRⅠ,Hind Ⅲ,λDNA/HindⅢ及λDNA/EcoRⅠ 标准质粒（或其他DNA样品）（浓度<0.5μg/μl） TAE缓冲液
三：操作
(一)EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ单酶切及双酶切
1, 取２支干净、灭菌新Eppendof管，分别按下表加入
Ａ(μl) B(μl)
灭菌水１3１3
EcoR Ⅰ缓冲液２
Hind Ⅲ缓冲液２
λDNA （或质粒DNA ） 4 4
EcoR Ⅰ１
Hind Ⅲ１
总体积２０２０
２，37℃保温１－4小时
3，保温结束后65-70℃10min灭活酶(如为热稳定性酶,则用氯仿抽提)
4，取2μl左右的反应液加入2μl电泳加样缓冲液，电泳
