一、实验目的
学习与掌握从琼脂糖电泳中回收DNA片段的方法
二、实验原理
对于混合的DNA样品（例如限制性酶切产物等）进行检测和纯化的一种常用方法是进行琼脂糖电泳分析，从电泳后的凝胶中回收出某一DNA带，经过有机溶剂的抽提等一系列纯化过程，便可得到纯化的DNA片段，回收的方法很多，如：电泳洗脱法、冻融挤压法、扩散浸出法、低熔点胶熔化法等，各种方法各有其优点，根据所要回收的DNA分子大小，回收的规模，凝胶的浓度等具体情况选择一种回收方法。
三、实验材料
λDNA的EcoR Ⅰ酶切产物
四、实验仪器、器皿及试剂
仪器、器皿（略）
试剂：低熔点琼脂糖 TE 苯酚 氯仿 EB 无水乙醇 70％乙醇 3mol/lNaAc等
五、实验步骤
1．配制1.0%的琼脂糖凝胶，加入EB至0.5μg/ml
2．加样电泳一段距离，在紫外灯下检测，当DNA片段充分分开后停止电泳。
3．在紫外灯下用小刀在所要回收带前挖一个长方形小洞。
4．将1.0％的熔化的低熔点琼脂糖凝胶（LMA）灌入洞内，凝固后继续电泳。
5．待目的带完全进入LMA后停止电泳，将含目的带的LMA切下装入eppendorf管。
6．加入5倍体积的TE混匀、
7．65℃水浴10min，摇晃，使胶融化。
8．加入等体积的苯酚抽提，10,000r/min离心5min，取上清。
9．加入等体积的氯仿抽提，10,000r/min离心5min，取上清。
10．加入3mol/lNaAc至终浓度为0.2mol/l，用2倍体积的无水乙醇在－20℃沉淀2小时。
11．12,000g离心15min，用70％乙醇洗涤沉淀，真空干燥。
12．溶于适量的TE中，取少量电泳或紫外检测。
