一、 实验目的
了解基因工程操作中运载基因的载体，掌握最常用的提取质粒DNA的方法。
二、实验原理
碱变性抽提质粒DNA是根据质粒DNA与染色体DNA的变性与复性差异而达到分离的目的。利用溶菌酶、强碱（NaOH）及表面活性剂（SDS）使细胞破壁、膜，释放出胞内染色体DNA、质粒DNA及其它物质。通过一系列的纯化过程：高盐除去核DNA，苯酚-氯仿抽提变性蛋白和脂类，然后用乙醇（或异丙醇）沉淀出质粒DNA和RNA等，RNA经RNase消化，得到质粒DNA。这种质粒DNA可用作基因工程的载体，更广泛地用于重组子的鉴定。
三、 实验材料
E.coli
四、 实验仪器、器皿及试剂
仪器、器皿（略）
试剂： 1、溶液1：50mmol/l 葡萄糖
10mmol/l EDTA-Na2
25mmol/l Tris-HCl（pH8.0）
4mmol/l 溶菌酶
2、溶液2：200mmol/l NaOH
1% SDS
3、溶液3：5mol/lKAc 60ml
冰乙酸 11.5ml
ddH2O 28.5ml
4、苯酚-氯仿
5、异丙醇（或95%乙醇，100%乙醇）
6、70%乙醇
7、TE（pH8.0）：10mmol/l Tris-HCl（pH8.0） 1mM EDTA-Na2
8、RNase1mg/ml Amp100μg/ml
五、 实验步骤
1．挑取一单菌落的E.coli菌种接种到含Amp100μg/ml的LB液体培养基中，37℃震荡培养过夜。
2．吸1.4ml菌液至Eppendorf管中，在高速台式离心机上5000g离心2min，倒去培养基。
3．重复1次，尽可能倒出培养基并将Eppendorf管倒置于吸水纸上，以吸干管壁上残留的培养基，收集细菌。
4．将细菌悬于500μl冰冷的溶液1中，于离心机上5000g离心2min。
5．倒去溶液1，再悬于200μl冰冷的溶液1中，重悬菌液。
6．加入300μl新配制的溶液2，冰浴5min。
7．加入300μl冰冷的溶液3，中和，轻轻震荡10sec，置冰浴5min。
8．于离心机上，12000g离心5min。
9．取600μl上清转移至一新管中。
10．加入等体积的饱和酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提1次，10000g离心5min取上清液，转移至一新管。
11．加入1/10体积NaAc溶液（3mol/l），再加入2倍体积的无水乙醇 ，－20℃沉淀20min。
12．10000g离心10min。
13．倒去无水乙醇，用1ml 70%乙醇洗涤沉淀，10000g离心5min。
14．置冰箱内开盖干燥。悬浮至40μl去离子水或TE中。
