酵母DNA的提取
1. 新鲜的菌体中加入150ul（200ul）bufferiI25(30)ul蜗牛酶（30mg/ml），37度，10Min（可以30min水浴，中间隔5分钟，振荡一次，避免细胞沉到管底。
2. 离心10000rmp，10min，去上清，沉淀中加入bufferII250ul
3. 加入25ul，10%SDS。65度，30min水浴。
4. 加入25ul 5mol/lKAC，冰浴60分钟（4度冰箱放置就可以）
5. 12000rmp，15min，取上清，在上清中加入2-3倍体积的无水乙醇，混匀放置－20度一小时（可过夜，取出后不要振荡，直接离心）
6. 12000rmp，15min，弃上清。
7. 150ul，bufferIII溶液沉淀，12000rmp，15min
8. 将上清溶液转到干净的离心管中，加入6ul（10ug/ul），Ran酶，37度，30min
9. 加入等体积异丙醇，4度静止10min，10000rmp，5min，溶于50ulbufferIII中
10. 如果有蛋白质可以使用酚氯仿抽提
11. bufferI：0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA
12. bufferII：50mmol/l Tris，20mmol/l EDTA
13. bufferIII：10mmol/l tris，1mol/l EDTA
14. 筛选AD/BD可以直接使用抗生素筛选的方法
酵母菌落PCR
1. 酵母质粒和基因组DNAPCR模版的制备
取对数生长期酵母菌株1.5ml，13000r/min，离心15s，去上清，双蒸水洗涤一次，13000r/min 离心15s，沉淀悬浮于200ulTE缓冲液中，在沸水上煮1-10min，冰浴10min，13000r/min，离心5min，将上清液储存于－20 度取1ul用于PCR
2. 从平板上调取长势良好的菌落少许，悬浮于含20ul无菌水的0.5ml eppendofff离心管中（离心管中央预先用注射器针头扎一个小孔，放置盖子因受热膨胀）水浴煮沸0.2.5.10min
3. 利用微波炉快速制备酵母治理以及菌落取直径大于3mm的酵母干菌落，至于EP管中盖上盖子，在微波炉中加热，加入30ulTE振荡，13000r/min，离心2-5min，上清储存浴－20度，取1ul来作PCR
真菌DNA的提取方法改良
1. 酵母活化后加入YEPD培养基，25-28度培养16-24小时，收集菌体
2. 取少许新鲜的菌体，加入0.6ml缓冲液I（0.9mol/l 山梨醇，0.1mol/l EDTA）1ml。0.1ml蜗牛酶（30mg/ml），37度温浴60min
3. 3000r/min离心10s，去上清，沉淀加入加入bufferII150mmol/l Tris，20mmol/l EDTA 1ml 10%SDS0.1ml65度，30min水浴。
4. 加入0.3ml ，5mol/lKAC冰浴60分钟
5. 10000rmp，15min，取上清，在上清中加入2-3倍体积的无水乙醇，混匀放置－20度一小时（可过夜，取出后不要振荡，直接离心）在 5000-6000r/min离心15s
6. 沉淀用0.6ml缓冲液III10mmol/l tris，1mol/l EDTA溶解1000r/min，离心15min
7. 上清液转移一个干净的离心管中，加入6ul10ug/ul），Ran酶，37度，30min
8. 加入等体积异丙醇，4度静止10min，10000rmp，5min，溶于50ulbufferIII中
9. 如果有蛋白质可以使用酚氯仿抽提
