凋亡细胞DNA片断提取操作步骤

2010-03-09 19:14 · Conrad

细胞DNA的提取: (1)消化细胞后以1500r/min离心,去上清后重悬于冰冷的1×TBS中,再次离心加入0.5ml提取缓冲溶液(RNA酶临时加入),移入 EP管中。 (2)37℃孵育1h,加4μl蛋白酶K/ml,50℃孵育3h。 (3)加入0.5ml酚/氯仿(1:1 V

细胞DNA的提取:

(1)消化细胞后以1500r/min离心,去上清后重悬于冰冷的1×TBS中,再次离心加入0.5ml提取缓冲溶液(RNA酶临时加入),移入 EP管中。

(2)37℃孵育1h,加4μl蛋白酶K/ml,50℃孵育3h。

(3)加入0.5ml酚/氯仿(1:1 V/V),快速来回颠倒几次。

(4)13000r/min离心1min,小心取上层含DNA的液相。

(5)估计体积加入等体积的酚/氯仿,快速来回颠倒几次。

(6)重复第4、5步,13000r/min离心1min,小心取上层含DNA的液相。

(7)加等体积的氯仿于液相样本中,颠倒混合,13000r/min离心1min。

(8)取液相加入2倍体积冰冷的纯乙醇和1/10体积的3mol/l的乙酸钠,冰浴30min。

(9)4℃13000r/min离心10分钟,弃上清,重悬于1ml的70%乙醇中。

(10)4℃13000r/min离心10分钟,尽可能弃上清。

(11)常温干燥30min,重悬于50μl的1×TE。

(12)于260nm和280nm测定DNA含量。

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