王友如
(湖北师范学院生物系，湖北黄石435002)
摘要：对于E coli茵株用8种不同浓度的CaC1 制备感受态细胞，然后转化各浓度的感受态细胞。实验结果表明，不同浓度CaCt2溶液处理所得到的感受态细胞，其转化效率有很大的不同。随着CaCI 浓度增高，转化效率也随之提高，在80m moL／L～100m moL／L时达到峰值，进一步提高CaC12的浓度，转化效率急剧下降。还探讨了一7O℃ 贮存时间对转化效率的影响。
关键词：质粒；感受态细胞；转化；转化效率
0 引言
质粒转化是分子克隆中最常用的关键技术之一。1972年，1973年Cohen用CaC1 法成功地将R 因子和重组质粒DNA分子导人E．coli细胞，此后，CaC1 法作为一项经典转化技术沿用至今，其间在转化方法上有过不少改进，为了掌握转化技术和转化条件，我们以E．coli作为受体菌，对影响质粒 DNA转化的重要因素——CaCl：浓度进行了研究。
1 材料和方法
1．1 材料和试剂
1．1．1 受体茵 E．coli由本实验室保存；pUC19由本实验室保存。
1．1．2 LB液体培养基蛋白胨10g，酵母膏5g，NaCI 10g，蒸馏水1L，PH7．0，121~C灭菌20min。固体培养基加人琼脂1．5％(m／v)抗性选择时加氨苄青霉素(Amp)母液1：1000(v／v)．
1．1．3 氨苄青霉素(Amp)母液(以下称Amp) 用无菌水配制成100mg／mL，置一20~C冰箱保存。
1．1．4 CaCI2溶液：称取适量无水CaC12(分析纯)用超纯水配制20mmol／L，40mmol／L，60mmol／L，
80mmol／L，100mmol／L，120mmol／L，140mmol／L，160mmol／L的溶液，高压灭茵。含15％甘油的CaC1，溶液。20mmol／L，40mmol／L，60mmol／L，80mmol／L，100mmol／L，120mmol／L，140mmol／L，160mmol／L，高压灭茵。
1．2 仪器设备
无菌工作台，分光光度计，电子天平，恒温培养箱，高压灭菌锅，恒温摇床，恒温水浴锅，低温冰箱，高速冷冻离心机，微量移液枪等。
1．3 方法 ．
1·3·1 受体茵的培养 从LB平板上挑取新活化的E．coli DH 单菌落接种于5mL LB液体培养基中，37℃下振荡培养2h一3h，到OD600=O．5左右，然后分装成50mL／份的培养液8份。
