刘涛 赵菊梅 梁传余 田聆 魏于全
目的：克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因，构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β，并检测其在体外的表达情况,为下一步研究鼻咽癌中HSP90β功能奠定基础。
方法：提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA.用纯化的hHSP90βcDNA与PGEM Easy T Vector连接,构建中间载体PGEM-hHSP90β.将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1(+)质粒经AflII和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后，体外连接酶切片段，构建hHSP90β真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β.经酶切和测序后，用脂质体包裹转染COS细胞，采用RT-PCR和Western blot检测HSP90β的表达。
结果：酶切及测序鉴定表明，hHSP90β与pcDNA3.1(+)体外重组成功，命名为pcDNA3.1(+)/hHSP90β。该表达质粒在体外转染COS细胞后可表达HSP90β分子。
结论：采用体外重组技术，成功地将人HSP90β插到了真核表达载体pcDNA3.1(+)中；pcDNA3.1(+)/hHSP90β表达质粒能在体外表达HSP90β分子。
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