利用谷胱甘肽S转移酶表达标签捕获系统性红斑狼疮相关基因IFIT1的相互作用蛋白质

2011-07-06 15:09 · raozihe

摘要:目的 试图运用蛋白组学的策略研究系统性红斑狼疮(SLE)相关的干扰素诱导蛋白IFIT1的蛋白质相互作用,以揭示其可能的功能。方法 应用荧光实时定量PCR进一步验证SLE患者外周血白细胞转录水平IFIT1基因的表达;应用分子克隆技术在大肠杆菌克隆并表达谷胱甘肽S转移酶(GST

摘要:目的 试图运用蛋白组学的策略研究系统性红斑狼疮(SLE)相关的干扰素诱导蛋白IFIT1的蛋白质相互作用,以揭示其可能的功能。方法 应用荧光实时定量PCR进一步验证SLE患者外周血白细胞转录水平IFIT1基因的表达;应用分子克隆技术在大肠杆菌克隆并表达谷胱甘肽S转移酶(GST)—IFIT1融合蛋白;利用GST表达标签,以GST—IFIT1为饵蛋白捕获SLE外周血白细胞蛋白裂解物中与IFIT1存在相互作用的蛋白质,MALDI—TOF—MS肽指纹图谱进行蛋白质鉴定。结果 荧光实时定量PCR证实IFIT1基因确在SLE(40例)较正常对照(29例)表达上调(P<0.001)。克隆表达了GST—IFIT1融合蛋白,并捕获到一个与IFIT1存在相互作用的蛋白质,经肽指纹图谱初步鉴定为Rho/Rac鸟嘌呤核苷交换因子。结论 IFIT1是SLE新的相关基因。运用蛋白组学的策略研究IFIT1蛋白质水平的相互作用显示,IFIT1与Rho/Rac鸟嘌呤核苷交换因子存在相互作用,IFIT1可能通过该途径影响Rho蛋白的活化,参与SLE的发病。

叶霜 庞海 顾越英 沈南 陈顺乐 陈兴国 华晶 钱捷 饶子和

上海第二医科大学附属仁济医院风湿学科,上海市风湿病研究所200001 清华大学生物系结构生物实验室 中国科学院上海生命科学研究院健康科学中心

关键词:谷胱甘肽S转移酶 表达标签 系统性红斑狼疮 基因 IFIT1 蛋白质

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