余相 刘瑞玉 刘集鸿
摘要：目的：克隆人趋化因子MIP-3α，进行原核表达并初步鉴定其趋化活性。方法：从人扁桃体中提取总RNA，进行RT-PCR，扩增MIP-3α成熟 蛋白基因，重组于pE332a（＋）载体，转化大肠杆菌BL21 TrxB（DE3），进行融合表达，Western blot验证融合蛋白，金属离子亲和层析，肠激酶酶切，弱阳离子交换层析，得到纯化的MIP-3α蛋白，趋化试验鉴定其趋化活性。结果：成功构建了 MIP-3α天然蛋白的硫氧还蛋白融合表达载体，表达并纯化出MIP-3α蛋白，Western blot证明融合蛋白能与羊抗人MIP-3α抗体结合，纯化的MIP-3α蛋白能趋化HEK293-CCR6稳定转染细胞。结论：构建的天然MIP-3α 融合表达载体以可溶性蛋白的方式稳定表达MIP-3α，初步纯化得到的MIP-3α具有趋化HEK293-CCR6稳定转染细胞的活性。
关键词：MIP-3α 融合表达 蛋白纯化
