作者： 肖高芳 姚志芳 賈俊雙 李艷青 鄢文 肖東 姚開泰
摘要：目的 構建攜帶人Oct4和EGFP基因的慢病毒表達載體pFUOGW。方法 Sac Ⅱ線性化pLentiEF1a-Oct4-IRES-EGFP,回收片段并補平Sac Ⅱ切口,接著BamH Ⅰ酶切該片段,回收2。565 kb片段而獲連接用Oct4-IRES-EGFP;EcoR Ⅰ線性化pFUGW,回收并補平EcoR Ⅰ切口,然后BamH Ⅰ酶切該片段,回收9。174 kb片段獲連接用載體片段,最后使用DNA連接試劑盒(TaKaRa)中的Solution Ⅰ將其與連接用Oct4-IRES-EGFP連接,連接產物轉化,次日挑選單菌落,提取質粒并行酶切鑒定。所構建載體命名為pFUOGW。獲pFUOGW后,按Invitrogen公司推薦的標準程序進行慢病毒包裝和確認慢病毒是否成功生產;攜帶Oct4和EGFP基因的慢病毒感染293FF細胞和鼻咽癌細胞株C666-1、CNEI和6-10B以建立相應病毒感染體系。結果 酶切鑒定證實成功構建了pFUOGW,按標準程序生產的攜帶Oct4和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染鼻咽癌細胞株C666-1、CNE1和6-10B。結論 成功構建攜帶人Oct4和EGFP基因的慢病毒表達載體pFUOGW,為相關后續的研究打下良好的基礎。
關鍵詞：Oct4 EGFP 慢病毒載體
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