摘要：人工构建的五螺旋蛋白(5-helix)能抑制人类免疫缺陷综合症病毒(HIV)介导的膜融合过程中发卡三聚体的形成，从而抑制病毒感染靶细胞。但5-helix基因在原核细胞中直接表达时易形成包涵体，复性困难，给研究带来不便。本研究探讨了将蛋白结构模拟用于寻找合适的表达载体的方式：通过同源建模，模拟了5-helix在pGEX-6P-1载体及pET44b载体上的融合蛋白形成的最有可能的2种构象。通过对比发现其在pET44b载体中与NusA的融合蛋白的溶剂化能远大于其在pGEX-6P-1中与GST融合蛋白的溶剂化能，且酶切位点位于蛋白表面。应用PCR将5-helix基因从pGEX-6P-1-5H克隆出来，鉴定正确后连接到pET44b载体上，构建成重组载体pET44b-PSP-5Helix.将重组载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)，于不同温度诱导表达。用镍柱及GST柱纯化蛋白，SDS-PAGE证实成功得到了目的蛋白。用纯化蛋白验证抑制HIV假病毒感染GHOST-CXCR4的活性。结果显示：与NusA融合的5-helix蛋白能够实现高效的可溶表达，且酶切容易；纯化蛋白抑制HIV假痛毒感染GHosT-CXCR4的半数抑制浓度为(22.77±5.64)nmol/L，为进一步探讨其在HIV-1病毒感染中的应用奠定了基础。
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