曲恒燕 刘泽源 李媛媛 孙曼霁
目的：确定TAT-tCNTF融合蛋白能够透过细胞膜进入细胞内，并研究其对Aβ诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用。
方法：重组PCR获得人截短型CNTF基因后,与pBV 220-TAT载体连接，在大肠杆菌中表达，细胞免疫荧光方法检测TAT蛋白运载融合蛋白穿过SH-SY5Y细胞膜的作用。Aβ_(25-35)诱导SH-SY5Y细胞产生神经毒性，采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测融合蛋白对细胞存活率的影响。eochst 33342/PI荧光双染法进行细胞凋亡和坏死的形态学观察，并进行LDH释放分析进一步检测TAT-tCNTF对细胞损伤后的保护作用。
结果：成功构建pBV220-TAT-tCNTF表达载体，Western blot结果表明重组融合蛋白可以与CNTF抗体特异性结合，细胞免疫荧光方法显示TAT-tCNTF能大量进入细胞，而rhCNTF只有微量进入细胞。对Aβ_(25-35)诱导损伤的SH-SY5Y细胞MTT、Heochst 33342/PI荧光双染法及LDH分析都表明TAT-tCNTF能明显提高细胞的存活率。
结论：TAT-tCNTF融合蛋白可以跨越细胞膜，能够保护Aβ_(25-35)诱导损伤的SH-SY5Y细胞，具有促进细胞生存生长的活性。
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