1.动物牺牲前先注入得以安乐死剂量的麻醉药（水合氯醛等）
2.开胸，使用4%PFA灌流（先将针头插入右心室，将左心房剪开）
3.灌流成功肝颜色会由红转白，PFA则会使尸体抖动僵硬
4.取下组织，并浸泡4%PFA 24小时
5.用10%或30%蔗糖脱水
6.使用OCT包埋，并隔着2-甲基丁烷液氮冷冻
7.上机切片10μm方便观察，30μm适合进行confocol z section
8.切完不立即使用，请置入-20°C冰箱，切片要在两周内使用。
附：4%PFA的配制
4%PFA较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
多聚甲醛 40g
0.01M磷酸缓冲液 至1000ml
配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.01M磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.01M的PBS至1000ml，充分混匀。
