今天，有个即将进入药监局的朋友来找我，和我一起讨论了关于Ames试验的相关问题。他是药学专业的，平时对于微生物相关技术不是很熟悉。我自认为自己是做微生物的，故满口答应了讨论的要求。
但是，当我们在整理Ames试验的相关实验技术和参数的过程中，发现了一些自己以前没有考虑过的重要问题。
首先介绍一下Ames实验的原理：
鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium）的组氨酸营养缺陷型（his－）菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变的细胞外，一般只能分裂几次，形成在显微镜下才能见到的微菌落。受诱变剂作用后，大量细胞发生回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。鉴于化学物质的致突变作用与致癌作用之间密切相关，故此法现广泛应用于致癌物的筛选。 （来源google）
看似很简单的一个实验设计，但是随着细致的推敲变发现了一些问题的所在。
1. 为什么要采用双层平板法？
2. 为什么在上层培养基中需要加入微量的（7.5mg/L）的组氨酸？
究其根源，通过讨论和思考得出以下结果：
1. 采用双层平板法不仅可以使得平板更加平整，而且可以使得结果更清晰。
2. 上层培养基加入的少量的组氨酸是可以使得菌株发生部分的繁殖，这一点是很重要的。因为菌株的回复突变是发生在DNA的复制和菌株的繁殖的过程中的。如果没有这少量的组氨酸，那么菌株是不可能发生所谓的回复突变的，因此也就无法检测所谓的结果。
用一句话总结便是：微量的组氨酸是可以促进菌株的回复突变的。
很多的时候，一些看似很简单的，明了的知识，如果仔细去推敲会发现很多有趣的地方。
“温故而知新”是很重要的。
