重组蛋白是生命科学研究和药物研发中熟耳能详的试剂,广泛用于结构生物学、点突变、免疫原、诊断试剂、抗体药物、疫苗的研究及开发。尤其是重组蛋白药物因其特异性强、毒性低、副作用小、生物功能明确等优势,已成为生物制药领域的重要品类之一。
重组蛋白是通过重组DNA或者RNA技术获得,通过体外表达,主要有四大平台即原核蛋白表达、哺乳动物细胞表达、酵母细胞表达和昆虫-杆状病毒细胞表达。重组蛋白在活性和应用领域方面均有所不同,不同的蛋白需要根据自身的需要选择合适的蛋白表达平台,以提高表达成功率和获得高活性的蛋白。
那么,应该怎样构建蛋白表达平台呢?
现在各实验室的硬件设施基本都能够满足重组蛋白的表达,尤其是原核细胞表达。只有实验室有摇床就能够进行培养,简单的粗纯甚至不要任何设备,有硫酸铵就可以。但是真核细胞表达比较复杂,需要选择合适的细胞、优质的细胞培养基以及纯化体系。高效的表达平台还需要高效的表达载体和高效的转染试剂。实验证实义翘神州构建的表达载体可以使表达量提高3-10倍,Sinofection转染试剂适用于多种细胞,成功用于6000多种蛋白质的表达。
培养基是蛋白表达的基础。原核表达平台对培养基要求比较简单,普通培养基能够满足表达需要。真核细胞因其本身结构的复杂性,对培养基的要求也较高。常用的哺乳动物细胞如HEK293、CHO,昆虫细胞Sf9、HF等,想要实现高效表达,就需要选择合适的细胞培养基。在本次讲座中,刘翼浩博士将会对如何选择细胞培养基进行详细的讲解,本文就不再赘述。
怎样完成蛋白表达实验方案的设计将会决定蛋白表达成功与否。其中的关键涉及到表达平台的选择、表达载体的构建、表达细胞的选择及培养条件的筛选,3月16日14:00,北京义翘神州刘翼浩博士都会对这些进行分享,同时还有对蛋白表达过程中的常见问题提出一些实用的解决方法,欢迎大家准时守候!