膜体系酵母双杂交体系中根据蛋白质结构不同，需要选用不同的载体，以便于与互作蛋白相连的泛素NubG和Cub-LexA-VP16可以相互作用，从而被泛素特异性蛋白酶（UBPs）识别、切割、启动报告基因表达。根据诱饵蛋白结构特点，膜体系有三种诱饵载体。
然而，这三种载体分别是在什么情况下使用呢，小编在此进行了总结。
01
如果你的感兴趣蛋白，也就是诱饵蛋白是N端位于胞质，C端位于细胞器腔内（或者胞外），那么建议使用载体pBT3-N构建诱饵克隆。下图是该种结构的示意图。
如果你的诱饵蛋白是C端位于胞质，N端位于细胞器腔内（或者胞外），且N端含有信号肽，那么建议使用载体pBT3-SUC构建诱饵克隆，这是因为某些哺乳动物细胞的信号肽在酵母中无法识别，而pBT3-SUC中含有一段酵素转化酶（SUC2）基因序列，当其定位在诱饵蛋白N端，能够确保诱饵蛋白正确定位到酵母细胞膜上。看一下它的载体图谱，你会更清楚噢。
从上图中可以看出，cDNA插入位点（sifI位点）的上游为SUC2，下游为Cub-LexA-VP16。即表达后诱饵蛋白N端含有SUC，而C端含有Cub-LexA-VP16，确保了诱饵蛋白能够顺利定位在膜上，且与互作蛋白的NubG相互作用。
如果你的诱饵蛋白是C端位于胞质，N端位于细胞器腔内（或者胞外），且N端不含信号肽，推荐使用pBT3-STE。
如果你的诱饵蛋白N端C端均位于胞质，则pBT3-N和pBT3-STE皆可，可以通过后期功能分析二者择一。
以上是对诱饵载体选择的总结
02
酵母双杂的另一半是猎物蛋白，在构建猎物cDNA文库时，载体怎么选择呢？
膜体系的猎物cDNA文库有两种，即NubG-X文库和X-NubG文库，所用载体分别为pPR3-N和pPR3-C。
这两种文库的区别是，NubG-X文库融合NubG编码序列到cDNA5'末端产生 NubG-cDNA的融合。（即，NubG在猎物蛋白N端。）X-NubG文库融合NubG编码序列到cDNA3'末端产生cDNA-NubG的融合。（即，NubG在猎物蛋白C端。）通常情况下，我们建议选择前者---NubG-X。这是因为相对后者，NubG-X的文库丰富度更高约107个独立克隆，插入片段更大，平均大小超过1.5 Kb。
当然，如果是已知猎物蛋白为I型膜蛋白（即上文中提到的C端位于胞质，N端位于胞外或细胞器腔内）则选择后者X-NubG。下图是这两种文库所使用的载体图谱。
好了，关于膜体系酵母双杂载体选择你是不是已经清楚了呢？
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