重组人蛋白的误区
目前,临床和实验室应用的重组人蛋白大多来源于大肠杆菌,其次是昆虫细胞、植物细胞、动物细胞等。虽然重组基因的序列是人的序列,合成蛋白的成分却来源于异源组分,因此,形成的蛋白质很难说是人蛋白。形象地解释,就是“橘生淮南则为橘,生于淮北则为枳,叶徒相似,其实味不同”。同时,在纯化过程中易增加异源蛋白的污染,临床应用时容易引起不良反应和体内抗体的形成。这样不仅给病人带来痛苦,而且药物的半衰期也会大大下降。
StemRD应用来源于人的细胞系,不仅可以生产出逼真的人源蛋白,而且无异源蛋白和其他成分的污染,这就达到了“橘生淮南”的效果。StemRD致力于纯化特殊的“困难蛋白因子”,在其他系统上表达没有活性的干细胞相关因子,StemRD通过尝试和努力,可以做到,同时也给医药的发展提供了很好的平台。
几种常见细胞因子表达系统的比较:

蛋白表达的背景(以人细胞和大肠杆菌细胞为例):蛋白质的合成是以DNA为模板,通过转录、翻译和后的修饰,蛋白才能有其生物结构和功能,最终达到靶器官才能起到生物学效应。特别是翻译后的修饰,如折叠、糖基化、磷酸化等都是在细胞器中进行的。而大肠杆菌内没有细胞器,翻译后的修饰多为人工修饰,其结构和自然结构也会有很大差距了。
好的产品都有什么特点?
1. 人源表达系统
工程药物合成来源于无支原体和病毒污染,有着良好安全记录的HEK293细胞,经过长时间的筛选和比较,得到既易于转染,又能大量表达目的蛋白的细胞HEK293TS。
2. 无动物源性
采用无血清(Serum-free)、无蛋白(Protein-free)、化学成分确定(ChemicallyDefined)的组合培养基,有效避免了血清中复杂的蛋白成分,如动物白蛋白(Albumin)、动物转铁蛋白(Transferrin)、动物胰岛素(Insulin)以及类胰岛素生长因子(IGF)对细胞和终产品的污染。
3. 高表达载体
创建特别适合人源细胞的高表达载体(Expression Vector),由人源超强启动子(Human)Promotor和信号肽(HumanSignal Peptide)驱动,相对于其它表达系统利用的病毒驱动子例如CMV和SV40,从安全和有效性上有了更好的保障。
4. 专有的纯化手段
重组蛋白质分子无标记(Tag-free),专有的纯化手段步骤少、效率高。
5. 低内毒素、高纯度
无异源性(Xeno-free)、无动物源性(Animal-free)、超低毒素、纯度高、无其它蛋白载体(如BSA)。
6. 可大量生产,降低成本
可以大量生产细菌宿主不能表达的系列蛋白,如转化生长因子超家族系列(TGF-β super families)。
7. 半衰期长、稳定性高
逼真的糖基化、磷酸化和正确的折叠,从而使体外的半衰期长、稳定性高。
StemRD的细胞因子类产品,可以用于干细胞和再生医学领域的研究,如人胚胎干细胞(hESCs)、诱导多能干细胞(iPSCs)、间充质干细胞(MSC)等的扩增与分化的理想产品,如Activin A、TGFs、BMPs、FGFs、Noggin等。我们还可以提高细胞培养基的原料添加物,如碱性成纤维细胞生长因子(FGF basic)和转铁蛋白(transferrin)等。
细胞因子常见问题分析
人源化的细胞因子和其他系统表达的细胞因子是否不同?
是的。因为细胞因子作为一种重组的蛋白质,不仅需要人的基因序列,而且需要转录后的修饰才能成为有功能的蛋白,如折叠、磷酸化、糖基化等。只有在人的细胞中表达的蛋白才和人的天然蛋白最相似。
StemRD细胞因子的稳定性如何?
StemRD的所有细胞因子产品均为冻干粉,它们在室温条件下非常稳定(至少1个月)。尽管如此,我们仍然建议您在收到我们常温寄送的产品后保存于-20°C,以确保蛋白100%的活性。大多数细胞因子,重悬后在4°C仅能短期保存(约1周)。如想长期保存,请先配制成稀释液()其中必须含有载体蛋白,如0.1%的HAS,0.1%BSA或10% FBS),然后分装冻存于-20°C或-80°C。注意一定要避免反复冻融,因每次冻融均会引起蛋白的部分降解。
如何确定细胞因子的种属交叉活性?
1) 大多数人类细胞因子对小鼠细胞均有活性,只有少数的细胞因子在鼠的细胞上没有活性,如下列细胞因子:INFs、IL-12、SCF、IL-3、IL-4等。
2) 许多小鼠细胞因子也可作用于人类细胞,但比活性可能低于对应的人类细胞因子。
3) 成纤维细胞生长因子(FGFs)高度保守,在不同动物种属细胞上均具有很好的活性。
到底什么是无动物成分(Animal-free)和无异源(Xeno-free)的重组蛋白?
1) 生产过程遵循严格的生产程序,生产车间、原材料及用品无动物源污染,如小牛血清等。
2) 蛋白质来源的细胞系是人的原代细胞,即避免了大肠杆菌、鼠源细胞(如CHO)、昆虫细胞(如SF9)和酵母细胞来源的异源(Xeno)污染。
不同的细胞因子是否需要不同的重溶缓冲液?
是的。多数细胞因子可溶于去离子水和PBS中。但因为有些细胞因子在酸性环境下容易溶解,而在中性或者碱性pH环境下容易沉淀,因此不同的细胞因子需要不同的重溶缓冲液。具体请参考每个细胞因子提供的说明书及使用指南。
