
韩国泡菜、德国泡菜和腌菜等发酵蔬菜中的优势细菌是明串珠菌(Leuconostoc),它在保持产品的质量中起着重要作用。同时,它是美国FDA认可的GRAS菌,也是国家卫计委认可的安全菌,不产内毒素,能分泌特异性胞外蛋白且没有蛋白降解活性,因此明串珠菌是表达异源蛋白的很好的候选菌。
河北工业大学化工学院莒晓艳、张舟等研究人员对明串珠菌进行了深入地研究,通过构建肠膜明串珠菌的基因失活体系,并验证其成功性。研究发表在汉斯《微生物前沿》2014年10月期刊上。

自然情况下,菌体内自发的同源重组效率相当低。2008年韩国的Eom以摘要形式报道过柠檬明串珠菌的基因失活,此后还没有明串珠菌的相关报道。本研究以乙酸激酶基因ack为目标序列,以四环素为筛选标记,构建自杀性重组质粒,转化肠膜明串珠菌,使染色体上基因失活,获得突变型菌株。




研究检测显示,四环素抗性基因表达盒连接到pTA2 T载体上,在T载体的左右多克隆位点上分别定向插入ack(乙酸激酶)的上、下游同源臂,构建成自杀性同源重组载体,转化明串珠菌,使染色体的ack失活,得到突变型。检测突变型产乙酸的量并利用PCR验证ack失活。与原始菌株相比,突变型的乙酸产量减少49.1%;突变型的ack PCR扩增产物比原始菌株的大1200bp左右。

本研究使肠膜明串珠菌的ack基因失活,从而阻碍了乙酸合成,导致乙酸的量减少和乙醇的量增加,符合理论上的预期结果。说明肠膜明串珠菌基因失活体系的构建成功。
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